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目的:观察口服降糖药米格列奈对高糖环境下内皮细胞一氧化氮(NO)合成及一氧化氮合酶(NOS)活力的影响;观察米格列奈对高糖环境下内皮细胞氧化应激反应的影响。方法:成功培养及传代人主动脉内皮细胞,分为J下常葡萄糖浓度组(5.5mmol/L的葡萄糖浓度)、高糖组(30mmol/L的葡萄糖浓度)、高糖+10umol/I.,的罗格列酮组、高糖+10umol/L的米格列奈组。分别于24、48、72小时收集细胞上清及细胞裂解液,ELISA法测上清中NO、上清及裂解液中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的含量;半定量RT-PCR检测细胞中eNOS mRNA的表达。比色法测6、12、24、48、72小时上清中超氧化物岐化酶(sOD)的活力及丙二醛(MDA)的含量。
结果:1、与正常组相比,高糖组细胞培养上清中iNOS含量增高(P＜0.05)。与高糖组相比,米格列奈组及罗格列酮组iNOS含量降低(P＜0.05)。2、与正常组相比,高糖组细胞内iNOS含量增高(P＜0.05);与高糖组相比,米格列奈组及罗格列酮组细胞内iNOS含量均降低(P＜0.05)。3、与正常组相比,高糖组细胞内及上清中eNOS含量降低(P＜0.05);与高糖组相比,米格列奈组及罗格列酮组eNOS的含量均增高(P＜0.05)。4、与正常组相比,高糖组24小时NO含量增加(P＜0.05),随时间延长NO含量减少,48、72小时含量明显减少(P＜0.05)。与高糖组相比,米格列奈组及罗格列酮组24小时NO含量降低(P＜0.05),随后逐渐升高,48、72小时含量明显增高(P＜0.05)。5、与高糖组相比,米格列奈组及罗格列酮组eNOS mRNA的表达升高(P＜0.05)。6、与正常组相比,高糖组SOD活力下降(P＜0.05),MDA含量增高(P＜0.05)。与高糖组相比,米格列奈组及罗格列酮组SOD活力升高(P＜0.05),MDA含量降低(P＜0.05)。
结论:1、高糖导致内皮细胞iNOS活性增强,eNOS活性和表达下降,NO早期产生增加而随着时间延长明显减少。高糖同时导致内皮细胞氧化应激损伤的发生。提示高糖诱导内皮细胞功能紊乱。
2、罗格列酮能减少高糖培养的内皮细胞iNOS的生成,增强eNOS的活性和表达,促进内皮细胞NO的产生。罗格列酮同时能减轻高糖引起的氧化应激损伤。提示罗格列酮可改善高糖引起的内皮细胞功能紊乱。
3、米格列奈能减少高糖培养的内皮细胞iNOS的生成,增强eNOS的活性和表达,促进内皮细胞NO的产生。米格列奈同时能减轻高糖引起的氧化应激损伤。提示米格列奈可改善高糖引起的内皮细胞功能紊乱。