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研究背景有机溶剂三氯乙烯（TCE）在工业上被广泛用作清洗剂和去脂剂。随着电子产业的迅猛发展，TCE的使用量逐年上升，已成为重要的职业毒物和广泛存在的环境污染物。除了引起明显的靶器官毒性外，研究表明TCE暴露与包括自身免疫在内的免疫相关效应明显相关，而受损的免疫系统有助于组织损伤的发生和发展。但TCE暴露引起的免疫性损伤机制目前尚未完全阐明。研究目的通过对饮水摄入TCE后小鼠脾脏Treg细胞的数量、特异性转录因子Foxp3mRNA和分泌的细胞因子IL-10检测，探讨TCE暴露对小鼠Treg细胞的影响；结合小鼠肝损伤和肝脏促炎细胞因子的检测，分析经水摄入TCE对小鼠调节性T细胞的影响与TCE暴露所致肝损伤的关系。研究方法选用6周龄雌性BALB/c小鼠饲养于清洁级动物房，染毒前适应性饲养1周，按随机数字表法分为空白对照组、溶剂对照组以及2.5mg/ml TCE组和5mg/ml TCE组，TCE经饮水染毒，分别在2、4、8、12周处死动物，采集外周血并无菌取肝脏和脾脏。采用流式细胞仪检测脾脏Treg细胞数量，荧光定量RT-PCR检测Treg细胞特异转录因子Foxp3mRNA表达水平，ELISA检测血清中Treg细胞分泌的IL-10含量；用生化分析法测定肝功能指标ALT和AST，取肝脏组织制成切片进行组织病理学观察，ELISA法检测肝脏组织匀浆液中促炎细胞因子IL-1、IL-6和TNF-α含量；用SPSS13.0统计软件包对实验结果进行统计分析。结果1一般情况在整个实验期间各组小鼠状态良好，未出现个体因染毒而死亡；各组小鼠饮水量无明显差异(F=0.89)，平均饮水量为0.13ml/(g·d)，2.5mg/ml和5.0mg/ml TCE组小鼠平均暴露量分别为450mg/(kg·d)和730mg/(kg·d)。各时间点各组小鼠体重增长、肝脏和脾脏脏器系数差异均无统计学意义。2饮水摄入TCE对小鼠Treg细胞的影响2.1对脾脏Treg细胞数量的影响在2、4、8、12周，溶剂对照组Treg细胞数与空白对照组之间差异无统计学意义；在2、4周，TCE暴露组Treg细胞数量均低于空白对照组及溶剂对照组（P<0.05）,且高剂量组比低剂量组下降趋势明显；在8、12周，TCE暴露组Treg细胞数量的下降有所恢复，只有8周时5.0mg/ml TCE组显著低于空白对照组（P<0.05），其余组与对照组之间差异均无统计学意义。2.2对脾脏Foxp3mRNA表达的影响在2、4、8、12周，溶剂对照组Foxp3mRNA表达与空白对照组之间差异无统计学意义；TCE暴露组Foxp3mRNA表达低于空白对照组及溶剂对照组（P<0.05），且高剂量组比低剂量组下降趋势明显；TCE组Foxp3mRNA表达下调在4周时达最低，在8、12周有所回升，在12周时4组之间差异均无统计学意义。2.3对血清中Treg细胞分泌的IL-10水平的影响在2、4、8、12周，溶剂对照组血清IL-10水平与空白对照组间差异均无统计学意义；在2、4周，TCE暴露组血清中IL-10水平均显著低于空白对照组及溶剂对照组（P<0.05）；在8、12周，TCE组IL-10水平与空白对照组及溶剂对照组相比差异均无统计学意义。2.4饮水摄人TCE小鼠脾脏Treg细胞数量与Foxp3mRNA表达水平和血清中IL-10含量相关性相关分析显示小鼠脾脏Treg细胞数量与Foxp3mRNA表达水平和血清中IL-10含量均存在显著正相关（r=0.630，0.593，P<0.01）。3饮水摄入TCE对小鼠肝脏的损伤3.1对肝功能的影响在2、4、8、12周，溶剂对照组小鼠ALT和AST水平与空白对照组比较差异均无统计学意义；在2、4周，TCE暴露组小鼠ALT和AST与空白和溶剂对照组比较明显升高（P<0.05），在4周时达到最高，8和12周时有所下降，但均高于空白对照组和溶剂对照组。3.2对肝脏组织病理学的影响空白对照组、溶剂对照组小鼠肝细胞排列整齐，胞质均匀，胞核大而圆，核仁明显，核膜清晰；TCE染毒组小鼠肝组织有明显的炎细胞浸润，在4周时最明显，8和12周时炎细胞浸润有所减少。3.3对肝组织中促炎细胞因子的影响3.3.1对肝脏IL-1含量的影响在2、4、8、12周，溶剂对照组小鼠肝脏IL-1水平与空白对照组比较差异均无统计学意义；在2、4周，5mg/ml TCE暴露组小鼠肝脏IL-1较空白对照组明显升高，4周时达到最高（P <0.05），8和12周时有所下降，但均高于空白对照和溶剂对照组。3.3.2对肝脏IL-6含量的影响在2、4、8和12周，溶剂对照组小鼠肝脏IL-6水平与空白对照组比较差异均无统计学意义；与空白对照和溶剂对照组比较，5mg/ml TCE组在4和8周时明显升高，4周时最高（P <0.05）；2.5mg/ml TCE组在8周时明显升高（P <0.05）。3.3.3对肝脏TNF-α含量的影响在2、4、8和12周，溶剂对照组与空白对照组之间差异均无统计学意义；在2、4、8周，TCE暴露组小鼠肝脏TNF-α含量均显著高于空白对照组及溶剂对照组，4周时达到最高（P<0.05）。3.3.4肝功能与肝脏IL-1、IL-6和TNF-α含量的相关性相关性分析显示肝功能ALT和AST，与肝脏中IL-1、IL-6和TNF-α含量之间存在显著正相关(r=0.526,0.510,0.614,0.518,0.525,0.630, P <0.01)。4肝功能、肝脏IL-1、IL-6和TNF-α含量与Treg细胞数量的相关性相关性分析显示肝功能ALT和AST，肝脏IL-1、IL-6、TNF-α含量与Treg细胞数量之间存在显著负相关(r=0.723,0.632,0.525,0.419,0.567, P <0.01)。结论1经水摄入TCE对小鼠调节性T细胞有显著影响，导致Treg细胞数量、特异性转录因子Foxp3mRNA表达和分泌的细胞因子IL-10表达水平显著降低。2经水摄入TCE可导致小鼠肝脏损伤，ALT、AST以及肝脏组织中促炎细胞因子水平升高，并观察到炎细胞浸润。3经水摄入TCE对小鼠调节性T细胞影响与其导致的肝脏损伤存在显著相关。