大鼠胰岛细胞移植及ICAM-1/LFA-1在排斥反应中作用的初步研究

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目的: 1、探讨STZ建立胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)大鼠模型的最适合剂量。 2、探讨胰岛细胞分离、纯化以及胰岛细胞移植物质量的鉴定方法。 3、胰岛细胞移植后,探讨细胞间黏附分子—1(ICAM—1)/淋巴细胞相关功能抗原—1(LFA—1)与移植免疫排斥反应的关系,揭示黏附分子参与移植免疫排斥反应的机理,为黏附分子单克隆抗体(mAb)在实验研究及临床的应用提供理论依据。 方法:研究分为三部分 1、建立大鼠糖尿病动物模型:将24只Wistar大鼠随机分为两组,A组(n=12),链脲佐菌素(STZ)腹腔内注射(55mg/Kg);B组(n=12),STZ腹腔内注射(65mg/Kg)。通过观察注射后静脉血血糖值、大鼠体重、尿糖及一般活动情况的变化,根据成模标准判断两组的成模率。 2、成年大鼠胰岛细胞提取、分离及纯化:经胆总管内逆行灌注胶原酶方法消化胰岛组织,Ficol1400液梯度离心纯化消化产物,获得胰岛细胞后双硫腙(DTZ)染色、吖啶橙-碘丙啶(AO-PI)双染色,结合糖刺激胰岛素释放试验鉴定胰岛细胞移植物的纯度、活率及功能质量等。 3、ICAM—1/LFA—1与胰岛细胞移植的关系:12只Wistar糖尿病大鼠分为两组,同种基因移植组(n=6)(Wistar大鼠胰岛细胞→Wistar大鼠糖尿病动物模型);异种基因移植组(n=6),(SD大鼠胰岛细胞→Wistar大鼠糖尿病动物模型)。术前术后均不用免疫移植剂,经门静脉途径移植后检测静脉血糖,流式细胞术检测ICAM—1/LFA—1的表达,运用免疫组化方法检测肝脏组织胰岛细胞形态学的变化。
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