Trigger Factor结构域的缺失对大肠杆菌的影响

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在大肠杆菌中,核糖体结合分子伴侣TF是新生肽链遇到的第一个分子伴侣,它在新生肽链在核糖体上的折叠阶段中具有重要作用。研究发现TF中各结构域都有着重要的功能,N结构域中包含与核糖体结合的位点,C结构域中包含与新生肽链结合的位点,P结构域具有肽酰顺反异构酶活性,具有辅助结合位点,所以P结构域是不可或缺的活性结构域。但TF各结构域的功能对大肠杆菌生理状态的影响并不清楚。因此,为了研究TF各结构域的功能,本论文将制备缺失TF单结构域的缺突变菌株,并在转录水平和表型水平上对其进行分析。本论文利用Red正负选择系统在野生型大肠杆菌BW25113菌株中的tig基因座进行了基因的敲入和敲除,获得了TF单结构域缺失突变菌株tig::nc、tig::pc、tig::np。通过高通量测序技术对这些突变菌株中的基因表达变化进行了分析,结果发现:tig::nc菌株中表达显著变化的基因有96个(表达上调的基因有88个,表达下调的基因有8个)、tig::pc菌株中表达显著变化的基因有183个(表达上调的基因有85个,表达下调的基因有98个)、tig::np菌株中表达显著变化的基因有142个(表达上调的基因有100个,表达下调的基因有42个)。对表达显著变化的基因编码的蛋白质性质进行分析,发现表达显著变化基因编码的蛋白质分子量在25-35k D范围所占比例最大,但表达显著变化基因编码的蛋白质的等电点和疏水性没有发现明显的变化规律。对突变菌株中的表达显著变化基因进行KEGG注释,结果发现:表达显著变化基因主要位于代谢通路、转录和翻译通路、膜脂通路。在不同条件下培养突变菌株,对突变菌株的表型进行分析,发现TF各结构域缺失的突变菌株在42℃热休克条件下可以正常生长,突变菌株对氧化磷酸化抑制剂DNP和地布卡因、蛋白合成抑制剂卡那霉素、去污剂SDS、细胞壁合成抑制剂氨苄西林刺激条件敏感。本论文研究结果为进一步阐释TF不同结构域的的功能奠定了基础。为TF分子伴侣的应用创造了理论条件。
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