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背景:宫颈癌是我国女性发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一,HR-HPV的持续感染是其主要病因。然而,大多数HPV感染是一过性的且无任何临床症状,仅少数持续感染的患者会进展为CIN甚至癌症,然而从最初感染经由癌前病变发展为宫颈癌,需要时间约为8-12年,在此期间,只要采用有效的筛查方法,就能够将宫颈癌扼杀在“癌前病变”的萌芽时期。HR-HPV检测是临床上常用的初筛手段,它常能提高灵敏度,但不能区别一过性感染和持续性感染,特别是育龄期女性的感染率高,但临床提示意义较弱,此方法的低特异度易引起有限医疗资源的浪费和对病人的过诊过治。TCT虽能提高宫颈筛查的特异度,但主观依赖性强、灵敏度低,具有局限性。因此,我们急需能够识别真正具有进展风险的、帮助医生分层管理HR-HPV阳性患者的分流策略。DNA甲基化是表观遗传的一种重要形式,往往出现于细胞恶性转化的早期阶段。目前普遍认为DNA异常甲基化有助于癌症的发生及发展,尤其发生于抑癌基因启动子区的高甲基化修饰,与宫颈病变的严重程度密切相关。利用全基因组Cp G岛微阵列筛选6个宫颈癌标志物:ASTN1、DLX1、ITGA4、RXFP3、SOX17和ZNF671基因,从而形成一个宿主基因甲基化组合的筛选面板,它包括这些宿主基因的富含Cp G岛区域,在宫颈癌及癌前病变中频繁发生甲基化,国外有研究表明基于ASTN1/DLX1/ITGA4/RXFP3/SOX17/ZNF671基因的甲基化组合在宫颈筛查中显示较高的特异度及敏感度,我国宫颈病变患者群体庞大,但国内尚未有研究以明确比较此甲基化组合与TCT或者两者联合检测对HR-HPV的分流效果。目的:本研究比较在不同级别宫颈病变中宿主基因甲基化组合与TCT两者表现的差异,以探讨宿主基因甲基化组合与TCT以及两者联合检测分流HR-HPV及诊断高级别宫颈病变的效果。研究方法:根据纳入排除标准,选取131例吉林大学第二医院门诊2019年09月至2019年12月因宫颈筛查异常而行阴道镜下宫颈活检的病例,收集其剩余液基细胞缓冲液,并准确记录病理结果及病史资料。其中2例因样本量较少无法行甲基化检测而被排除,根据病理结果分为:宫颈炎（CIN0组）45例、CIN1组28例、CIN2组20例、CIN3组23例、宫颈癌（CC组）13例;根据HR-HPV分型检测分为:HPV16/18阳性者99例（HPV 16/18组）、其他12种HR-HPV阳性者30例（非HPV16/18组）;根据年龄分为:大于或等于35岁者94例（年长组）、小于35岁者35例（年轻组）。利用统计学方法比较分析宿主基因甲基化组合与病理结果、HR-HPV分型及年龄的关系,并比较此甲基化组合与TCT以及两者联合检测对HR-HPV的分流效果,其中p<0.05比较差异有统计学意义。结果:1、宿主基因甲基化组合在CIN0、CIN1、CIN2、CIN3及CC组中的甲基化率分别为8.9%,7.1%,50.0%,91.3%及100.0%,差异具有统计学意义,两两组间比较:CIN0与CIN1组间、CIN3与CC组间,差异均无统计学意义,而CIN2组的甲基化率显著高于CIN1组、显著低于CIN3组,差异均具有统计学意义。总体来看,甲基化率在CIN1-（8.2%）、CIN2（50.0%）及CIN3+（94.4%）中呈明显增加趋势,整体比较及两两组间比较差异均具有统计学意义。2、宿主基因甲基化组合的甲基化率在HPV16/18组比非HPV16/18组中稍高,差异无统计学意义,而年长组的甲基化率显著高于年轻组,差异具有统计学意义。3、宿主基因甲基化组合的得分中位数在CIN1-（0）、CIN2（0.45）及CIN3+（1.2）呈明显增加趋势,整体比较及两两组间比较差异均具有统计学意义。4、宿主基因甲基化组合使阴道镜转诊率降低至38.8%,其鉴别CIN2+/CIN 1-、CIN3+/CIN2-及CIN3+/CIN1-分类的灵敏度分别为78.6%、94.4%及94.4%,特异度分别为91.8%、82.8%及91.8%。相对于年长组,宿主基因甲基化组合在年轻组显示出较低的灵敏度,但较高的特异度。5、对于CIN2+/CIN1-及CIN3+/CIN1-的鉴别诊断,宿主基因甲基化组合的灵敏度显著高于TCT（78.6%vs 44.6%;94.4%vs 61.1%）,差异具有统计学意义,而特异度略低于TCT（91.8%vs 98.6%）,差异无统计学意义,对于CIN3+/CIN2-的鉴别诊断,两者的敏感度和特异度均有统计学上的显著差异（94.4%vs 61.1%;82.8%vs 95.7%）。对于CIN2+/CIN1-、CIN3+/CIN2-及CIN3+/CIN1-的鉴别诊断,宿主基因甲基化组合的Youden指数分别为70.4%、77.2%及86.2%,而TCT的Youden指数较低,分别为43.2%、56.8%及59.7%。此外,与宿主基因甲基化组合相比,其联合TCT没有显著提高对所有分类诊断的灵敏度及特异度,差异比较均无统计学意义。6、6个单独宿主基因的甲基化率在CIN0-3及CC组中比较差异有统计学意义,两两组间比较:CIN0和CINI组间、CIN3和CC组间,6个基因的差异比较均无统计学意义,CIN1和CIN2组间、CIN2和CIN3组间,仅有ZNF671基因的差异比较具有统计学意义。就单个宿主基因的甲基化检测而言,ITGA4基因诊断CIN2+/CIN1-、CIN3+/CIN2-及CIN3+/CIN1-的特异度最高,分别为97.3%、95.7%及97.3%,但灵敏度最低,分别为35.7%、50.0%及50.0%;而ZNF671基因的分流效果最佳,诊断CIN2+/CIN1-、CIN3+/CIN2-及CIN3+/CIN1-的灵敏度分别为78.6%、94.4%及94.4%,特异度分别为95.9%、86.0%及95.9%。7、在随访的1年时间内,组织学为宫颈炎及CIN1的6例甲基化组合阳性患者中的1人失访,剩余5例患者的HR-HPV检测结果持续阳性,其中1人再次行宫颈活检,组织学进展为CIN2。本研究又追踪了CIN2组中未实施手术治疗的5例患者,其中2例为甲基化组合阳性患者,他们的HR-HPV检测在随访中持续阳性,剩余3例为甲基化组合阴性患者,其中2人的HR-HPV检测结果转为阴性,另外1人的HR-HPV检测显示仍为阳性,但病毒载量有所下降,且TCT结果由ASC-H转为NILM。结论:1、本研究中宿主基因甲基化组合与HR-HPV分型无关,与病理结果、年龄有关,其甲基化率在CIN1-、CIN2及CIN3+中呈明显增加趋势,且在年轻组中明显降低。2、宿主基因甲基化组合在不降低灵敏度的情况下能够明显降低阴道转诊率,这对育龄期女性尤其重要,它对CIN3+/CIN1-的鉴别效果最佳,灵敏度及特异度分别为94.4%及91.8%。其次是CIN3+/CIN2-,灵敏度及特异度分别为94.4%及82.8%。3、宿主基因甲基化组合分流HR-HPV的效果优于TCT。但与宿主基因甲基化组合相比,两者联合检测的分流效果未见明显改善。4、就单个宿主基因甲基化检测而言,ZNF671基因的分流效果最佳,且诊断所有分类的灵敏度及特异度水平与宿主基因甲基化组合相当,单个ZNF671基因甲基化检测的优点在于简便经济,宿主基因甲基化组合的优点在于其评分大小可能与病变严重程度存在联系。5、宿主基因甲基化组合为管理CIN2提供了一个新的思路,且具有识别出短期内存在进展风险的HR-HPV阳性患者的可能,但仍需要大样本数据支持该结论。