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研究目的:1.优化人参皂苷C-K制备工艺条件,以生物转化技术完成人参皂苷C-K的批量制备。2.借助雨蛙素联合脂多糖诱导成立重症急性胰腺炎大鼠模型,研究人参皂苷C-K对重症急性胰腺炎大鼠胰腺病理学改变、血清淀粉酶、血清脂肪酶、NF-κBp65表达、胰腺水肿指数及炎性因子影响。3.通过基础实验证明人参皂苷C-K具有抗重症急性胰腺炎作用,为后续人参皂苷C-K被应用于临床实验抗重症急性胰腺炎、为免疫调节治疗与护理提供循证基础依据。研究方法:1.人参皂苷C-K的制备流程的优化以富含原人参二醇类皂苷的三七总皂苷为原料,经蜗牛酶处理,把原人参二醇类皂苷Rb1转化获得人参皂苷C-K,而后采纳大孔吸附树脂柱层析技术处理,通过工艺优化,从而获得高质量的人参皂苷C-K。2.人参皂苷C-K对重症急性胰腺炎大鼠作用的实验研究2017年7月-2018年10月,校医药研究中心、抗衰老研究所、烟台某生物科技有限公司。该实验严格按照某医学院实验动物保护和使用指南,某医学院实验动物使用和保护委员会批准该实验。取SD雄性大鼠60只,按体重随机选择10只为A组(空白对照组),另外50只大鼠腹膜内注射雨蛙肽和脂多糖,建立重症急性胰腺炎模型,随机分成B组(SAP模型组)、C组(地塞米松0.15mg.ml-1)、D组(人参皂苷C-K高剂量4.Omg.ml-1)、E组(人参皂苷C-K中剂量2.0mg.ml-1)和F组(人参皂苷C-K低剂量1.0mg.ml-1)。腹腔注射脂多糖溶液后的1h、3h、6h,C组灌胃给予地塞米松混悬液,每次4ml,D-F组灌胃分别给予人参皂苷C-K高中、低剂量混悬液每次4ml,A、B组每次灌胃同等量的5%的羧甲基纤维素钠溶液。建模24h后各组处死10只大鼠,切除胰腺组织用HE染色察看其病理变化,用干湿法检测胰腺的水肿指数;ELISA法检测IL-1β、TNF-α、IL-6、超氧化物歧化酶、髓过氧化物酶等水平变化,全自动生化分析仪测定血清淀粉酶、血清脂肪酶的水平,免疫组化观察NF-κBp65的表达水平。研究结果:1.以水为溶剂,每500L溶液中含三七总皂苷25kg和蜗牛酶2.5kg,调pH值为4.5,45℃搅拌酶解48h,过滤,沉淀物溶于40%乙醇,用AB-8大孔吸附树脂处理,上样量相当于三七总皂苷量与树脂用量的比例为15:1(g/L)。上样后,先用65%乙醇洗涤3个柱体积,然后用70%乙醇洗脱4个柱体积,收集后者的洗脱液,在减压下浓缩和除去乙醇,过滤后,将沉淀物真空干燥,获得高转化率的人参皂苷C-K。2.雨蛙素结合脂多糖诱导大鼠重症急性胰腺炎模型建立,造模后24h,与B组(SAP模型组)比较,C-F各组在病理学改变、水肿指数、炎性因子表达、血清淀粉酶和血清脂肪酶进行比较,人参皂苷C-K各剂量组能降低血清淀粉酶和血清脂肪酶水平、减轻胰腺水肿、抑制炎性因子表达、抑制NF-ΚBp65活性,其中人参皂苷C-K高剂量组与人参皂苷C-K中、低剂量组比较,有显著疗效(P<0.01)。研究结论:1.以蜗牛酶水解三七总皂苷,优化大孔吸附树脂层析技术,可完成人参皂苷C-K的批量制备,工业化生产的适应性较好,成品得率、人参皂苷C-K含量较为稳定,C-K纯化过程中转移率较好。2.人参皂苷C-K高剂量组与人参皂苷C-K中、低剂量组比较,降低了炎症因子IL-1β、TNF-α及IL-6的过分表达,可能与抑制NF-κBp65的表达水平有关。3.人参皂苷C-K高剂量组与人参皂苷C-K中、低剂量组比较,显著降低了血清淀粉酶和血清脂肪酶活性,减轻胰腺水肿,人参皂苷C-K具有抗重症急性胰腺炎作用。