无核葡萄是当今世界葡萄消费和育种的重要方向之一,但生产上主要栽培的欧洲葡萄无核品种抗病性差,中国野生葡萄是抗葡萄真菌病害的重要基因资源。通过向欧洲葡萄无核品种转移抗病基因是培育抗病无核品种的有效途径。利用课题组通过mRNA差显技术从中国野生葡萄高抗白粉病的华东葡萄白河-35-1中克隆的与抗白粉病相关的基因乙二醛氧化酶新基因cDNA全长序列,通过构建表达载体pWR306- GLOXrg,采用农杆菌介导法对欧洲无核葡萄品种无核白、底来特和爱莫无核及烟草,进行了转基因研究。取得的主要结果:1.无核葡萄试管苗的建立对经4℃低温沙藏的葡萄硬枝,冬季以10%的石灰氮涂芽处理,促进萌芽,用新梢建立葡萄无菌系。对葡萄新梢剪取单芽茎断进行扩繁。适宜的继代培养基为NN69+ 0.1 mg/L IBA,生根培养基为1/2MS+0.1 mg/L NAA。2.葡萄器官再生途径的建立以无核葡萄叶片、叶柄及茎断为外植体,进行再生研究。筛选获得的适宜培养基分别是,叶片再生:MS+2.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+500 mg/L CH+5 g/L PVP;叶柄和茎断再生:NN69+4.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+500 mg/L CH+5 g/L PVP。3.葡萄胚状体途径方式的再生以爱莫无核自交的胚珠为试材,剥胚进行胚状体诱导。幼胚在培养基(WP(固)+ 0.225 mg/L 6-BA+60 g/L蔗糖+2 g/L活性炭+500 mg/L水解酪蛋白)上胚性愈伤和胚状体的诱导率为75%;在培养基(WP(固)+ 1.0 mg/L TDZ+60 g/L蔗糖+2 g/L活性炭+500 mg/L水解酪蛋白)上胚性愈伤和胚状体增殖良好。4.中国野生葡萄属乙二醛氧化酶植物表达载体的构建双酶切重组质粒pGEM-T-GLOXrg与中间表达载体pWR306,将GLOXrg基因片段与线性表达载体pWR306进行定向连接,构建了芪合成酶基因的植物表达载体。通过酶切、电泳鉴定,证明GLOXrg基因已成功构建到植物表达质粒pWR306中,将此克隆命名为pWR306-GLOXrg。