疼痛是正畸治疗中常见的问题之一。通常在加力后几小时出现，持续几天后消失。目前对正畸致痛机制的研究大多局限于牙周组织内的神经改变，而对初级感觉神经元胞体及其中枢末梢端改变的研究很少。传导口颌面部疼痛的初级感觉神经元位于三叉神经节(TG)，其外周突伸向外周组织，感受外周刺激；中枢突将外周信息传至三叉神经脊束核尾侧亚核(Vc)，在此中继后传至上位脑中枢，完成初级感觉信息的传递。因此，探讨在正畸加力状态下，这些神经元上特异表达的受体、通道或信号转导分子发生的可塑性变化，有助于我们阐明正畸疼痛的发病机制。 其中，CGRP是极为重要的疼痛兴奋性递质。其在初级感觉神经元合成、表达和释放的增加是神经元兴奋性增高、致敏的标志，也是机体产生慢性疼痛的主要机制。因此，观察正畸加力后TG及其周围突和中枢突CGRP的变化，能明确正畸加力是否发生了初级中枢的敏化现象，有助于了解正畸致痛的机制。 另外，大量研究显示神经生长因子(NGF)在痛觉过敏及异常疼痛中发挥重要作用。损伤局部区域内的NGF通过与支配该区域感觉神经末稍上的高亲合力受体TrkA结合后，逆转运至神经元胞体，导致神经元发生可塑性改变，合成神经肽增加，从而使初级感觉神经元致敏，导致痛觉过敏。而有关牙周膜内NGF高亲合力受体-TrkA的报道很少。 针对上述研究现状，我们设计本实验： 第一部分： 实验性牙移动cGRP在初级感觉神经元的改变 目的：观察实验性牙移动后，初级感觉神经元兴奋性递质CGRP的合成、外周及中枢端末梢释放的状况。分析正畸疼痛时，初级感觉神经元痛信号发生、传导以及敏感化机制。解放军军医进修学院博士论文中文摘要 方法:制备大鼠实验性牙移动动物模型，采用Rl’- pCR方法观察不同时间点三叉神经节CGR卫mRNA表达的变化。采用免疫组织化学染色方法，观察牙髓、牙周膜、TG及vc内CGRP免疫阳性结构的改变。 结果: (1)实验性牙移动后牙髓、牙周膜内CGRP一ir神经纤维染色强度先减少而后增加。实验侧牙髓及牙周膜内CGRP一i:神经纤维在加力后6H、24H组明显少于对照组;3D组较对照组增多;lw组增多最为明显;ZW组逐渐恢复至对照组水平。 (2)实验性牙移动后6H组实验侧TG CGRP一ir节细胞少于对照组;3D组、IW组，实验侧CGI理一ir细胞多于对照组，其中3D组增多最为明显;ZW组，恢复至对照同一水平。 (3)实验性牙移动后6H，实验侧TG CG即mRNA的表达没有明显改变;、24H组、3D组、IW组，实验侧TG CGR卫mRNA的表达强于对侧;ZW组，左右侧TG表达CGRP mRNA无明显差异。 (4)实验性牙移动加力后6H、24H实验侧vc内CGRP一ir结构小于对照侧;加力后3D组CGRp一ir结构面积大于对照侧，但无统计学意义;IW组实验侧V。内CGRP一ir结构面积明显大于对照侧;加力后ZW，实验侧与对照侧vc内CG即一ir结构面积相近。 结论:实验性牙移动后，初级感觉神经元中痛感受兴奋性神经递质CGRP的合成、表达以及外周端和中枢端释放增加。表明实验性牙移动影响了初级感觉神经元痛信号的发生、传导，使之致敏。分析初级神经元敏感性增加，伤害感受器致敏，为正畸致痛的原因之一。第二部分:实验性牙移动TG内TrkA的改变目的:观察实验性牙移动时，NGF受体一TrkA在TG内的改变，及其与解放军军医进修学院博士论文中文摘要CGRP改变的关系。 方法:采用RT-PCR及免疫荧光方法研究实验性牙移动后，TG内TrkAn1RNA及其免疫阳性细胞的改变。 结果: (l)实验性牙移动加力6H组实验侧TrkA一ir神经元与对照组相比无明显差别;24H组、3D组、lw组，实验侧TG实验侧TrkA一i:神经元增多，并大于对照组;其中，24H组实验侧TrkA.ir神经元最多;ZW组，实验组TGTrkA一ir神经元与对照组相比无明显差异。 (2)实验性牙移动后6H，实验侧TrkA mRNA的表达没有明显改变;24H、3D组，IW组实验组TG内TrkA mRNA的表达强于对照组;ZW组，实验侧TrkA mRNA的表达恢复至正常水平。 结论:实验性牙移动时，TG内TrkA的表达升高，TI，kA一ir神经元也增多。其增多的变化趋势和时间与CGRp的变化相似，但略早于TrkA。提示其二者之间存在相关性。由于NGF与TrkA结合后可以促进感觉神经元表达神经肤SP和CGRp，我们分析TrkA可能通过调控CGRP的表达而间接的参与实验性牙移动时的痛觉传递以及牙周组织的骨改建。第三部分:神经生长因子在牙周组织中的表达 目的:研究牙周组织中是否存在NGF的表达。 方法:采用Rl’- pCR方法研究培养的人牙周膜成纤维样细胞(hPDLF)是否表达NGF InRNA;采用hPDLF条件培养基与PclZ细胞共培养的方法研究hPDLF是否分泌具有活性功能的NGF。 结果: (1)通过RT-PCR技术，在培养的hPDLF中扩增出NGF mRNA阳性产物。 (2)在hPDLF条件培养基中培养的PC12细胞长出突起，向神经元样细胞解放军军医进修学院博士论文中文摘要分化。对照组及NGF抗血清培养的PC12细胞仅有少量长出突起。 结论:本研究通过离体研究初次显示培养的人牙周膜成纤维样细胞(hPDLF)表达NGF mRNA并分泌NGF蛋白，提?