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钠/碘同向转运体(NIS)是位于甲状腺滤泡细胞基底膜上的一种糖蛋白,介导甲状腺激素合成的第一步,即碘的主动转运。NIS在甲状腺的病理生理中举足轻重,近年来它已成为碘缺乏病和其他甲状腺疾病防治领域的研究热点。 本研究工作中,笔者以大鼠cDNA文库为模板,PCR方法扩增出全长大鼠NIS基因编码序列,克隆入pGEM-T Easy载体。然后将目的片段分别插入非融合型原核表达载体pBV220和融合型原核表达载体pGEX-3X中。重组表达质粒pBV220/NIS和pGEX-3X/NIS分别转化到大肠杆菌DH5 α和BL21(DE3)中诱导表达。据SDS-PAGE电泳我们发现前者未见明显表达,而后者有期望蛋白表达。以GST标签抗体行Western blotting进一步鉴定该融合蛋白。优化表达条件并对包涵体进行分离、溶解和复性处理,使得融合蛋白的产量达总蛋白的58%,相当于1.02g/每升培养物。 本实验在大肠杆菌中成功表达了大鼠NIS基因,为基因工程制备NIS蛋白奠定了基础。