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第一部分：pAcGFPl-N1-FOXQ1真核表达载体构建及在大肠癌细胞系Colo-320及HCT116中的表达目的：构建人FOXQ1基因(Homo sapiens forkhead box Q1, FOXQ1)真核表达载体pAcGFP1-N1-FOXQ1,研究其在大肠癌细胞系Colo-320及HCT116中瞬时表达的情况方法：利用PCR方法从YR Gene装载了FOXQ1基因全长cDNA序列(NM033260)的质粒中扩增出FOXQ1的cDNA片段,与真核表达载体pAcGFP1-N1连接,重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定无误后,采用Lipofectamine2000瞬时转染Colo-320及HCT116细胞,应用荧光显微镜观察转染效率、Western blot. RT-PCR检测FOXQ1蛋白表达水平；结果：成功构建了真核表达载体pAcGFP1-N1-FOXQ1, PCR、双酶切和测序鉴定结果均正确,载体能在大肠癌细胞系Colo-320及HCT116中正确表达FOXQ1蛋白.结论：成功构建FOXQ1真核表达载体,为进一步开展体内、体外实验,研究FOXQ1基因的在肿瘤发生发展中的功能奠定了实验基础.第二部分：含pAcGFP1-N1-FOXQ1真核表达载体的大肠癌细胞系HCT116中EGF与EGFR的表达情况及EGF在结直肠癌(CRC)中的表达及意义。一.含pAcGFP1-N1-FOXQ1真核表达载体的大肠癌细胞系HCT116中EGF与EGFR的表达情况目的：研究含pAcGFP1-N1-FOXQ1真核表达载体的大肠癌细胞系HCT116中EGF与EGFR的表达情况。方法：已构建好的pAcGFP1-N1-FOXQ1真核表达载体利用Lipofectamine2000瞬时转染HCT116细胞,应用Western blot、RT-PCR及ELISA检测EGF及EGFR的表达水平;结果：载体在大肠癌细胞系HCT116中EGFR的表达情况与FOXQ1的表达情况一致,但EGF的表达情况不理想。结论：载体在大肠癌细胞系HCT116中EGFR基因的表达情况与FOXQ1基因的表达情况基本一致,表明在大肠癌中FOXQ1基因与EGFR基因表达可能具有相关性,为之后进一步利用Superarray功能基因芯片平台筛选出FOXQ1基因参与调控的EGF信号通路中肿瘤血管生成相关的下游靶基因奠定实验基础；但本细胞实验中EGF基因的表达情况不理想,考虑EGF为分泌型蛋白,主要存在于细胞膜上,在细胞中的含量可能相对较少,并且它的表达可能与肿瘤组织的发生发展过程密切相关,利用细胞实验难以验证,故予进一步加做组织免疫组化检测结直肠癌(CRC)组织中EGF的表达情况。二.EGF在结直肠癌(CRC)中的表达目的：探讨结直肠癌(CRC)中EGF表达情况。方法：连续收集云南省第一人民医院2012年2月至2014年2月共120份研究样本,包括手术切除的正常结直肠黏膜组织(距癌旁≥8cm)40例及结直肠癌(CRC)DukesA或B期40例和结直肠癌(CRC)DukesC或D期40例,用即用型(Envision)冲洗酶免疫组化法检测上述组织中的EGF的表达情况。结果：EGF在正常结直肠黏膜组织(距癌旁≥8cm)中无表达,在CRC中的表达阳性率均高于正常结直肠黏膜组织,并且EGF在CRC DukesC或D期高于DukesA或B期;有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者。结论：结直肠癌(CRC)患者组织中EGF表达情况高于正常结直肠黏膜组织,EGF可能参与了结直肠癌的发生发展。