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目的:探索RASSF1A在正常的胃黏膜上皮细胞及不同的胃癌细胞株蛋白含量差异,分析RASSF1A在胃癌的表达与生存预后的相关性。并通过体外实验验证RASSF1A影响顺铂在胃癌细胞中的药物敏感度,及进一步探索RASSF1A通过调控JNK通路介导胃癌EMT的机制,为胃癌的靶向治疗提供理论依据。方法:1.首先通过生物信息库,分析RASSF1A基因在胃癌和正常组织中表达差异及生存预后。然后以体外培养的胃黏膜细胞株GES-1,胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901、HGC-27及AGS作为研究对象,将实验分成5组,以正常的胃黏膜上皮细胞株GES-1作为对照组,利用蛋白免疫印迹实验(Western Blot,WB)技术检测RASSF1A在不同的胃黏膜上皮细胞株中的蛋白表达水平;2.将携带NC和RASSF1A质粒的慢病毒,转染MGC-803和SGC-7901胃癌细胞株,并用Western Blot技术检测RASSF1A蛋白表达水平验证转染效率,然后进行CCK8实验证明RASSF1A影响顺铂对胃癌细胞的毒性;3.以体外培养的胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901作为研究对象,将实验分成4组,DMSO组为对照组,0.5 umol/L,1.0 umol/L及2.0 umol/L为实验组,加入对应浓度的茴香霉素(Anisomycin)持续刺激细胞1小时,2小时及4小时。利用Western Blot技术检测JNK通路激动剂茴香霉素(Anisomycin)刺激细胞后,JNK、P-JNK及EMT标志物、转录因子Snail等指标的蛋白表达水平变化,作为后续实验的给药方案;4.在MGC-803胃癌细胞株成功转染携带NC和RASSF1A质粒的慢病毒后,提取胞浆、胞核蛋白,利用Western Blot技术定位RASSF1A、JNK、P-JNK指标的蛋白分布。然后加入Anisomycin分别刺激转染了NC及RASSF1A慢病毒的胃癌细胞株,并将实验分成4组:DMSO+NC,Anisomycin+NC,DMSO+RASSF1A,Anisomycin+RASSF1A,利用Western Blot检测RASSF1A、JNK、P-JNK、EMT标志物等指标的蛋白水平变化,探索RASSF1A通过调控JNK通路介导胃癌EMT的机制。结果:1.与正常的胃黏膜细胞株GES-1相比,RASSF1A蛋白在MGC-803、HGC-27及AGS胃癌细胞株中低表达,差异具有统计学意义(P<0.0001)。与低表达RASSF1A患者相比,RASSF1A高表达胃癌患者总生存期(OS)长,差异具有统计学意义(P<0.0001)。2.RASSF1A促进顺铂对胃癌细胞的药物敏感性CCK8实验结果显示:在MGC-803胃癌细胞株中,与NC组相比,顺铂在RASSF1A组的细胞毒性更大(NC组IC50为1.932 ug/ml,RASSF1A组IC50为1.215 ug/ml);在SGC-7901胃癌细胞株中,与NC组相比,RASSF1A组对顺铂的药物敏感性更高(NC组IC50为3.040 ug/ml,RASSF1A组IC50为1.737ug/ml)。3.成功转染NC和RASSF1A的MGC-803及SGC-7901胃癌细胞株后,加入Anisomycin刺激细胞,Western Blot结果显示:与RASSF1A+DMSO组相比,RASSF1A+Anisomycin组的P-JNK及Vimentin蛋白明显升高,E-Cadherin蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.RASSF1A在大多数胃癌细胞株低表达,RASSF1A高表达是胃癌患者的有利预后因素。2.RASSF1A增加了顺铂在胃癌的药物敏感度。3.RASSF1A通过下调JNK通路磷酸化抑制胃癌EMT发生。