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高迁移率非组蛋白(High mobility group chromosomalprotein,HMG)是脊椎动物和非脊椎动物的细胞核中含量最为丰富的非组蛋白家族(Bustin M,1996),这一家族的成员普遍存在于高等真核生物中,因其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的高迁移率而得名。研究发现,HMG主要结合于真核细胞的活性转录基因的核小体区域内,在维持染色质活性结构,以及基因转录、复制等过程中起着重要作用。目前HMG分为三个亚家族,分别为HMGA、HMGB和HMGN。HMGN2为HMGN亚家族的成员之一,其基因位于染色体1q35,相对分子质量为9.2KD,共由90个氨基酸组成。
在80年代有不少学者从牛、鼠、兔等动物中分离提纯出HMGN2,并且对它的生物学活性进行了充分的研究,发现它不仅与维持染色体的结构(Marta Prymakowska-Bosak等,2001)、细胞的功能、基因的转录和活化过程(Lillian Medina等,1998;Crippa MP等,1993)有密切关系,随后还发现其具有很强的杀菌功能。因为抗菌肽的杀菌机制完全不同于传统的抗菌药物,因此HMGN2的抑菌机制受到广大学者的关注。
本实验设计引物从重组质粒PUC57-HMGN2扩增牛源HMGN2基因,构建PET-32a(+)-HMGN2和pGEX-KG-HMGN2重组表达质粒,经IPTG诱导原核表达后,在相同条件下重组表达质粒。pGEX-KG-HMGN2表达量大于PET-32a(+)-HMGN2。高表达量的重组表达质粒pGEX-KG-HMGN2,其表达产物在上清和包涵体中都有存在。通过制备包涵体并纯化包涵体的方式获取GST-HMGN2融合蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定其分子量,并且通过Western-blot方法分析鉴定融合蛋白HMGN2免疫学活性。选用金黄色葡萄球菌ATCC25923;猪大肠杆菌E052(0-9102)、E126(O-138)、Wh1(O-74)、E107(O-161)、Wh3(O-139)、X002(O-11)、ETEC;鸡大肠杆菌O2、O78;鼠伤寒沙门氏菌;猪链球菌2型标准菌株,采用微量肉汤法和薄层琼脂糖孔穴扩散法检测其体外抑菌活性,结果表明纯化后的牛源HMGN2融合蛋白对猪大肠杆菌Wh3(O-139)和金黄色葡萄球菌ATCC25923均具有抑制作用,最小抑菌浓度分别为2.5μg/ml和5μg/ml且抑菌效果与浓度呈正比。