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该论文以健康、发育正常的20日龄二级SD雄性大鼠为研究对象,无菌条件下取其肾周、腹股沟、附睾远端的脂肪组织,用胶原酶Ⅰ消化后获得前体脂肪细胞,以5×10<4>个细胞/cm<2>的密度接种于M199+10%FBS培养液,在37℃、5%CO<,2>条件下培养8-10d.利用台盼蓝染色、HE染色、荧光染色、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法,研究了TNF-α对大鼠脂肪细胞凋亡的影响,同时探讨了不同浓度维生素C及胰岛素对TNF-α诱导的脂肪细胞凋亡作用的影响.旨在为进一步阐明TNF-α诱导脂肪细胞凋亡的机制奠定基础,为畜禽体脂沉积和人类肥胖症及相关疾病治疗提供理论依据.不同浓度TNF-α对大鼠脂肪细胞凋亡作用的实验结果表明,TNF-α能诱导脂肪细胞凋亡,其形态学变化与TNF-α浓度呈线性相关,在5-20ng/mL范围内,浓度越大,凋亡特征越明显;以5ng/mL TNF-α处理培养的脂肪细胞,可见凋亡的形态学变化,但电泳结果未见梯状条带,说明细胞凋亡的形态学变化早于凋亡的生化特征性改变;TNF-α对脂肪细胞凋亡的诱导作用,在5-20ng/mL浓度范围内还存在剂量-效应关系,浓度为5、10、15和20ng/mL的TNF-α处理组与对照组之间有极显著差异(P<0.01),但10ng/mL与15和20ng/mL处理组之间差异不显著(P>0.05),以10ng/mL为最佳诱导凋亡浓度.以10ng/mL TNF-α处理体外培养的大鼠脂肪细胞,观察了作用0h、12h、24h、36h和48h后脂肪细胞的形态学变化,并采用流式细胞术检测了脂肪细胞的凋亡率.结果表明,随作用时间延长,脂肪细胞逐渐出现明显的凋亡形态学特征,48h后多以晚期凋亡为主;细胞凋亡率也随作用时间延长而呈上升趋势,处理组与对照组之间差异极显著(P<0.01),但36h和48h间的凋亡率没有显著性差异(P>0.05),即以36h为最佳诱导凋亡作用时间.探讨了不同浓度维生素C(Vc)对TNF-α诱导脂肪细胞凋亡的影响,结果表明,高浓度Vc(100μmol/L)能引起脂肪细胞凋亡,低浓度Vc(5,10μmol/L)处理未检测到凋亡;100μmol/L Vc能促进TNF-α诱导的脂肪细胞凋亡,凋亡率显著高于单用TNF-α处理(P<0.01);5和10μmol/L Vc抑制TNF-α诱导的脂肪细胞凋亡,凋亡率显著低于单用TNF-α处理(P<0.01).探讨了不同浓度胰岛素对TNF-α诱导脂肪细胞凋亡的影响,研究发现,低浓度胰岛素(0.5nmol/L)能引起脂肪细胞凋亡,高浓度胰岛素(5,50nmol/Lol/L)处理未检测到凋亡.0.5nmol/L胰岛素和10ng/mL TNF-α共同作用,能促进脂肪细胞凋亡,凋亡率显著高于单用TNF-α处理(P<0.01);5、50nmol/L胰岛素和10ng/mLTNF-α共同作用,抑制TNF-α诱导的脂肪细胞凋亡,凋亡率显著低于单用TNF-α处理(P<0.01).