网状原角藻(Protoceratium reticulatum)产毒特性及虾夷扇贝毒素的提取与纯化研究

来源 :大连海洋大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:duzitengnihaoma
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虾夷扇贝毒素(Yessotoxins,YTXs)是近年来发现的一类聚醚类海洋生物毒素,主要由甲藻门中的网状原角藻产生,另外多边舌甲藻和具刺膝沟藻也被报道可产此类毒素。此前世界多个国家和地区均有检出,该毒素不像传统的腹泻性贝毒会引起腹泻效应,但会对心、肝脏、神经系统等组织器官造成损伤,是一种对人类和生态系统具有潜在危害的脂溶性毒素。2007年,我国首次检出了YTX及其衍生物,被我国逐步认识,并引起重视,对高纯度的YTX的需求愈来愈大。由于高纯度的YTX价格昂贵,限制了其在我国各个领域的应用。因此,当前我国研究出一种分离纯化YTX的方法显得很有必要。本文通过实验室大量培养的网状原角藻,使用液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)对其生长曲线的各个时期每个游动细胞的产毒状况进行定性定量分析;并对YTX提取的条件进行优化;以及通过低压柱层析法分离纯化虾夷扇贝毒素(YTX),以期得到纯度较高的YTX样品。通过进行LC-MS/MS毒素分析,本藻株的游动细胞可产YTX和少量的Homo-YTX,其中YTX为主要的毒素组分,藻株在一个生长周期产YTX为3.9~71 pg cell-1。游动细胞在生长平台期后期产毒最高。通过单因素实验,对影响YTX提取的有机溶剂浓度和提取条件进行了优化,得到最优条件为:提取溶剂甲醇浓度为90%,料液比为1:120;超声萃取时间10 min;提取次数为2次,即可达到97.7%的提取率。为进一步得到YTX纯化样品,本研究通过低压柱层析法分离纯化YTX,比较了3种性质的氧化铝纯化YTX的效果,以YTX的出峰时间、回收率和变异系数为评价指标,结果表明:碱性氧化铝最好,出峰快、回收率最高,变异系数最小;C18出峰快,回收率(%)为88.4±4.0,变异系数为5%;RP-18出峰快,回收率(%)为28.7±3.0,变异系数为10%。综上所述,柱层析后的样品经LC-MS/MS分析表明从网状原角藻中分离纯化的YTX样品纯度为99%。以上工作是国内首次对YTX分离纯化方法进行研究,其结果可以为得到更高纯度的YTX提供基础数据。
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