胃癌miRNA表达谱的鉴定及miR-374b-5p的功能研究

来源 :南华大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:f40042
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:通过鉴定与人胃癌密切相关的microRNAs(miRNAs)表达谱,初步筛选出在人胃癌细胞株中高表达的miRNAs;探讨miR-374b-5p、RECK与胃癌侵袭转移生长的关系,进一步阐明miR-374b-5p在胃癌发生、发展中的可能机制。方法:1.体外培养人胃癌细胞株SGC-7901、MGC-803、NCI-N87和正常胃黏膜上皮细胞GES-1,分别提取总RNA进行miRNA芯片分析;qRT-PCR技术验证部分差异表达的miRNA。2.通过生物信息网络平台预测目的miRNA的作用靶点。设计合成has-miR-374b-5p ASODA,将其转染于人胃癌细胞株MGC-803,以空载体和无关寡核苷酸序列为对照。qRT-PCR检测转染效率;CCK-8法观察胃癌细胞转染后的生长情况;Trans-well小室法和划痕试验观察胃癌细胞转染后的侵袭和迁移影响;qRT-PCR验证RECK表达变化;Western Blot法验证RECK蛋白表达。结果:1.微阵列芯片可见,相对正常胃粘膜细胞GES-1,共有115个miRNAs在胃癌细胞株中存在两倍及以上差异表达;其中在NCI-N87细胞中27个miRNAs表达上调、25个miRNAs表达下调,在SGC-7901细胞中21个miRNAs表达上调、8个miRNAs表达下调,在MGC-803细胞中19个miRNAs表达上调、15个miRNAs表达下调。选取MGC-803细胞中上调表达的miR-374b-5p、miR-182-5p、miR-15-5p进行qRT-PCR验证,证明芯片结果基本可信。miR-374b-5p在MGC-803细胞中明显高表达。2.通过生物信息学分析发现,RECK可能为miR-374b-5p的靶基因。MGC-803细胞以Lipofectamin2000为转染试剂时,其转染效率在80%左右。转染miR-374b-5p抑制剂后,胃癌细胞miR-374b-5p表达显著降低。转染后miR-374b-5p抑制组较对照组的抑制率明显增高。转染hsa-miR-374b-5p抑制剂后细胞侵袭和迁移的能力均下降。qRT-PCR发现转染组较对照组RECK的mRNA明显上升;Western Blot法检测发现转染组RECK蛋白表达上升。结论:1.初步筛选出109个与人胃癌相关miRNAs。2.miR-374b-5p可能在人胃癌中高表达。3.miR-374b-5p可能通过RECK通路调控胃癌侵袭转移,并可能作为一种促癌基因参与胃癌的发生与发展过程。
其他文献
进入21世纪以来,通过申办奥运、亚运等国际竞技体育盛事,我国的体育事业迎来了前所未有的大发展。国内的全运会、省运会等竞技比赛也达到了空前繁荣。正是由于竞技体育的普及
<正>由上海岱山电力安装工程有限公司开发的锅炉柔性密封技术,适用于锅炉密封。主要技术内容一、基本原理锅炉柔性密封技术以动态吸收锅炉膨胀为密封理念、以专业密封用陶瓷
随着世界能源危机的日益严重和新能源发电技术的不断提升,近几年我国分布式光伏发电建设增速明显。光伏电源的接入会改变原有电网的潮流、继电保护和调度模式等,通过仿真软件
随着我国科学技术的不断提升和农业水平的持续发展,信息技术在农业生产经营领域得到了大力推广和普遍应用。现代农业示范区作为当前我国农业建设的重点领域,不仅要推广园区的
将具有保温功能的医疗设备的温度控制在设定值的合适范围内具有重要意义。传统的温度监测方法主要是人工判断,对主观经验依赖性较大,而且过于简单,遇到复杂情况将无法判断温
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)在全球人口中的感染率超过50%,已被确定为慢性胃炎、消化性溃疡的重要致病菌,并被世界卫生组织列为胃癌的Ⅰ类致癌因子。表位是抗
目的观察哌甲酯联合多动宁胶囊治疗注意缺陷综合征的疗效。方法120例注意缺陷综合征患儿随机分为哌甲酯组(西药组),多动宁胶囊组(中药组),哌甲酯联合多动宁胶囊(综合组)各40
大学生村官工作作为中央立足长远作出的一项重大战略决策,正显示出积极效应。由于大学生村官其特殊角色身份的影响,他们的自身知识结构尚不全面、任职动机也有所偏差,有效融入农
随着现代通信技术的高速发展和通信新设备的出现,人们对测试方法和测试测量仪器的精度、测试参数、测试速度、频率范围等也提出了更高的要求,矢量信号源作为重要的测试测量仪器
<正> 在伽利略的运动学研究中,自由落体运动是一个重要课题。他敏锐地认识到,通过打开自由落体运动这个缺口,会导致一门新科学的诞生。他在《两门新科学》(即《关于两门新科