论文部分内容阅读
目的：本课题旨在用pH-敏感性肠溶材料丙烯酸树脂Eudragit S100作为载体,将难溶性药物蛇床子素(Ost)包裹以得到具有被动靶向性的蛇床子素纳米粒(Ost-S100-NPs)及其冻干制剂(Fd-Ost-S100-NPs),并对该纳米制剂的处方组成、制备工艺、体内药动学与组织分布、体内外抗肿瘤活性进行考察,以期得到一种安全有效的具有pH敏感性的蛇床子素新剂型。方法：(1)采用乳化-溶剂扩散法制备Ost-S100-NPs,并通过真空冷冻干燥法制备Fd-Ost-S100-NPs。以粒径分布、包封率、载药量为综合指标,采用L9(34)正交实验优化制备工艺.(2)采用透射电镜观察Ost-S100-NPs的表面形态,动态激光散射法测定平均粒径与粒度分布,差示扫描量热法(DSC)和粉末X-ray衍射等技术对其表面特征、外观形态进行鉴别验证,并以动态透析法考察纳米粒胶体的体外释放特性。(3)以双周期交叉随机试验设计法,小鼠灌胃给予Ost、 Ost-S100-NPs,用3P97软件计算药动学参数。以药动学参数(AUC,AUQ,Cmax,Tmax)和靶向参数(Te, RTe,TI)为评价指标。(4)通过MTT法评价Ost及Ost-S100-NPs对人肝癌细胞SMMC-7721、肺腺癌细胞A549和宫颈癌细胞Hela-3的细胞毒作用；并运用流式细胞法考察药物对细胞诱导凋亡的作用机制。(5)通过建立H22、U14和S180细胞小鼠荷瘤模型,考察纳米粒在小鼠体内的抗肿瘤活性,包括肿瘤生长、体重抑制、抑瘤率、对免疫器官的影响等,并用生物显微镜观察肿瘤组织的病理学相关性质。结果：(1)优化工艺制备的纳米粒的平均粒径(55.46+2.19)nm,包封率(98.99±0.16)%,载药量(23.85±0.29)%。(2) DSC、X衍射图谱中,纳米粒的特征吸收峰均与物理混合物不一样；透射电镜(TEM)照片显示纳米粒近似球形、边缘清晰；纳米粒体外释放呈现pH依赖性,符合Weibull方程。(3)经3P97软件拟合,Ost和Ost-S100-NPs在小鼠体内的药代动力学过程均符合二室模型。与Ost相比,Ost-S100-Nps的AUC显著增大(P<0.05),CL(s)显著降低(P<0.05),相对生物利用度为163.9%。组织分布实验结果表明Ost-S100-NPs改变了药物在体内的分布,相对提高了在肾脏和肝脏的分布,降低了脾中的分布,具有一定的肝肺靶向作用。(4)体外细胞作用结果显示：对于Hela、A549和SMMC-7721三种肿瘤细胞,Ost和Ost-S100-NPs均有一定程度的杀伤作用,其中Ost-S100-NPs的细胞毒作用要强于Ost。细胞凋亡实验和Hoechst染色实验证实了Ost-S100-NPs通过诱导细胞凋亡来抑制细胞生长。(6)体内抗肿瘤实验表明相比生理盐水组,Ost、Ost-S100-NPs和Fd-Ost-S100-NPs均能有效地抑制H22、S180和U14肿瘤的生长。其中以Ost-S100-NPs效果最优,Fd-Ost-S100-NPs次之,Ost效果最差。结论：优化的蛇床子素纳米粒制备工艺简单易行、成本较低、方法稳定。纳米粒在体外具有缓释特性和pH敏感性,体内组织分布及代谢广泛,促进了药物口服吸收,显著提高了Ost的生物利用度。纳米粒独特的EPR (enhanced permeability and retention effect, EPR)效应能显著提高药物的抗肿瘤作用。研究结果显示,这种新型pH敏感性纳米药物输送系统具有良好的开发应用前景。