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目的：研究携带有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因的重组9 型腺相关病毒（rAAV9-EGFP)对大鼠心脏成纤维细胞的转染，并研究携带有抗NF-κB 核酶基因的重组9 型腺相关病毒（rAAV9-EGFP-R65)对细胞核转录因子-κB（NF-κB)的影响。方法：1．分离、获取并培养大鼠心脏成纤维细胞，以rAAV9-EGFp转染大鼠心脏成纤维细胞，按照转染复数(multiplicities ofinfection, MOI)的不同将细胞分为MOI=0（未转染病毒）组、MOI=1×104 组、MOI=1×105 组、MOI=1×106 组，采用倒置荧光显微镜观察转染后细胞生长形态；2．观察EGFp的表达情况并观测表达高峰时间，应用流式细胞仪检测转染效率，评价并选择出较好的MOI 以进行后续实验；3．采用AlamarBlue 法检测rAAV9-EGFp对细胞增殖的影响。4．同法分离、获取并培养大鼠心脏成纤维细胞，将细胞分组为四组：对照组、转染rAAV9-EGFP-R65 组、应用TNF-α处理组以及转染rAAV9-EGFP-R65后应用TNF-α处理组，采用凝胶迁移滞后实验(EMSA)检测NF-κB 活性，并采用蛋白质印迹杂交法(Western blot)检测NF-κB P65 蛋白的表达。结果：1．MOI=1×106 组细胞于转染后24h 即可观察到EGFp表达，MOI=1×104组和MOI=1×105 组细胞可在转染后48h 观察到EGFp表达。2．倒置荧光显微镜下观察转染后大鼠心脏成纤维细胞的生长状况与形态未见到有异常变化，各组细胞EGFp表达的强度随MOI 值的增高而增强，且可随着时间延长而增强，在转染后120h 达到高峰，此时检测rAAV9-EGFp对心脏成纤维细胞的转染效率分别为MOI=1×104 组：(2.6±0.2)%，MOI=1×105 组：(7.3±1.4)%，MOI=1×106 组：(45.1±2.7)%。3．AlamarBlue 法检测表明各转染组细胞各时点与未转染组的还原率比值接近于1，表明rAAV9-EGFp对大鼠心脏成纤维细胞的增殖无明显抑制作用。4．进一步实验表明，在常态下大鼠心脏成纤维细胞NF-κB 具有一定的活性，在TNF-α作用下NF-κB 活性明显可以明显增高，而rAAV9- EGFP-R65 能够抑制TNF-α作用下细胞内NF-κB 活性增高；同时，rAAV9- EGFP-R65 转染细胞后，NF-κB 活性基团P65的表达受到抑制。结论：AAV9-EGFp能够有效转染大鼠心脏成纤维细胞，转染后EGFp基因能够有效得以表达， rAAV9 对细胞增殖无明显抑制。应用rAAV9-EGFP-R65 能够抑制大鼠心脏成纤维细胞NF-κB 活性，并能够抑制大鼠心脏成纤维细胞P65 蛋白表达。