羌活种子生物学、离体培养及遗传多样性的初步研究

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羌活(Notopterygium incisum)是传统中草药,主产四川、甘肃、青海和云南。由于植被的破坏、生境破碎化,以及商品经济利益的驱使,高寒区野生药用植物羌活的野生种群受到严重破坏。又由于其种子学、生理学和遗传背景等研究的不足,制约了人工引种驯化栽培和快繁体系的建立,从而也限制了对羌活资源的保护进程。目前获得羌活资源的方式依然靠采挖残存的野生资源,使得已经易危的羌活濒临资源灭绝的威胁。为保护羌活资源提供理论依据和实践指导,本研究主要从羌活种质资源的遗传多样性、离体培养和种子发芽三个方面进行研究,得到以下几点结论:1、采用改良CTAB法提取植物基因组DNA,首次使用SCoT分子标记技术对3个不同来源的羌活居群共38份材料进行种质资源的遗传多样性分析。每个引物能扩增出的多态性条带为5~12条不等,10条SCoT引物共扩增出107个DNA片段,扩增产物长度多集中于750~2000bp。其中,具有多态性的DNA扩增片段为72个,所占总扩增条带数的67.29%。平均每个引物可扩增出7.2个多态性条带。聚类分析表明,利用SCoT分子标记技术完全可以将不同来源的羌活材料区分开来,供试材料的相似性系数分布于0.400~0.914之间,说明不同地理来源的羌活之间存在较大的遗传差异;在相似系数0.67处将38份羌活材料聚为5大类。在该相似系数处3大居群被分开,表明不同羌活居群之间存在较为丰富的遗传变异。2、设置13种不同的外源激素配比诱导羌活愈伤组织。筛选出最适诱导羌活愈伤组织的激素配比为:MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L。其愈伤组织诱导率为34%。以羌活根茎上萌发的根芽为外植体进行离体培养,最容易诱导出愈伤组织。3、羌活种子吸水24h后种子重量不再增加,其最大吸水量为1.231g。在开始6h种子处于快速吸胀阶段,吸水量达种子干重的26.27%,之后速度减慢,吸水量为36.58%,趋于平衡。羌活种子的吸水量最高可达41.23%,说明羌活种子的种皮透水性良好。而是否去除种皮在羌活种子发芽率和发芽速度上不存在明显差异。此外,赤霉素溶液处理对羌活种子萌发影响不大,只有当浓度为400mg/L时,发芽率达到12%。而层积处理能明显提高羌活种子发芽率。结合400mg/L的赤霉素处理的变温层积解除休眠效果最好,发芽率达到了46.00%,较直接沙层积提高16.33%。裸层积操作简单易行,与对照相比也能显著提高发芽率,但其最大的缺点是发芽不稳定,含水量不好控制,受外界环境影响较大。
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