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背景:宫颈癌是全球最常见的妇科肿瘤之一,人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)的持续感染是其首要启动因素。HPV是一种双链环状DNA病毒,其编码的早期蛋白E6、E7是导致宫颈细胞恶性转化的关键蛋白。然而,仅有HPV的感染不能导致细胞的恶性转化,它仅作为宫颈致癌过程的第一次打击。HPV感染宫颈上皮后所诱导的宿主细胞内一系列的分子信号通路的改变,最终导致细胞发生了恶性转化。然而,目前HPV致宫颈癌发生发展的机制仍有待进一步阐明。凝缩蛋白Ⅰ复合体的非染色体结构维持蛋白的亚单位H(Non-SMC CondensinⅠ Complex SubunitH,NCAPH)基因,主要参与间期核染色质转变成高度螺旋的核染色体,以往有研究显示:NCAPH与非小细胞肺癌的不良预后有关,这提示NCAPH可能与肿瘤的发生发展有关,但机制不明。目的:本课题拟通过体外实验初步阐明NCAPH在宫颈癌中的表达情况、对宫颈癌细胞生长的影响及其可能机制,初步揭示HPVE7与NCAPH之间的调控关系。方法:1)收集10例正常宫颈及22例宫颈癌的新鲜组织标本,提取组织内的总RNA并逆转录为cDNA,同法提取三种宫颈癌细胞系中的总RNA并逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR法检测NCAPH的表达,对比其在正常宫颈及宫颈癌中的表达差异。收集65例正常宫颈组织及149例宫颈癌的石蜡标本,免疫组织化学方法检测其中NCAPH蛋白的表达,对比正常宫颈及宫颈癌中NCAPH蛋白的表达差异;2)培养宫颈癌细胞系HeLa和SiHa,瞬时转染靶向NCAPH siRNA,利用CCK-8试剂盒、平板克隆形成实验检测NCAPH对细胞增殖的影响;利用transwell迁移与侵袭实验检测NCAPH对细胞迁移与侵袭能力的影响;3)培养HeLa和SiHa,转染NCAPH siRNA,利用Western Blot和实时荧光定量PCR法检测相关蛋白的表达变化;4)利用JASPAR及PROMO软件预测NCAPH启动子区的转录因子,挑选评分最高的转录因子E2F1;在HeLa和SiHa中干扰和过表达转录因子E2F1,检测NCAPH的mRNA和蛋白表达变化;5)将NCAPH基因启动子区序列连接到pGL3-Basic载体上,构建转录因子E2F1的过表达载体,然后共转染293T细胞,利用双荧光素酶报告检测系统验证转录因子E2F1是否可以结合NCAPH启动子区,激活NCAPH基因的转录;6)培养HPV16E7高表达的细胞系RPE1 E7及其对照细胞系RPE1,检测E7过表达对NCAPH及转录因子E2F1的表达的影响;在HeLa和SiHa中干扰E7,检测NCAPH及转录因子E2F1的表达变化;在RPE1E7细胞中干扰转录因子E2F1的表达,检测敲低E2F1能否影响E7对NCAPH表达的影响。结果:1)NCAPH在3种宫颈癌细胞系中均有表达;与正常宫颈组织相比,NCAPH在宫颈癌组织中的表达水平显著升高;2)CCK-8、平板克隆形成实验结果显示:干扰宫颈癌细胞中NCAPH的表达后,细胞增殖能力明显下降,克隆形成能力显著降低;3)干扰宫颈癌细胞中NCAPH的表达后,细胞的迁移和侵袭能力均受到明显抑制,上皮相关的蛋白ZO-1表达水平显著升高,而间叶相关的蛋白表达水平Vimentin、Snail显著下降;4)干扰宫颈癌细胞中NCAPH的表达后,细胞内的总AKT没有明显变化,而丝氨酸473位点磷酸化的AKT蛋白的表达显著降低;5)转录因子E2F1可以结合在NCAPH的启动子区并上调NCAPH的转录,HPV的关键致癌蛋白E7可以通过调控E2F1上调其下游的NCAPH的表达。结论:NCAPH可能作为一种新的癌基因参与宫颈癌的发生发展。它可以显著促进宫颈癌细胞的增殖,并通过促进EMT增强宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力。HPV E7可能通过转录因子E2F1激活NCAPH的转录从而参与宫颈致癌过程。