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以四倍体刺槐胚珠和成熟种胚为材料,探讨了胚胎发育、败育与内源激素含量变化的关系,以及成熟种胚的变异和生理生化特性,并通过离体组织培养技术进行了挽救。结果表明:
(1)四倍体刺槐幼胚在授粉后10d和100d时败育现象明显,败育率可达60%~70%,30d时败育率最低,仅为27%,败育主要发生在前期和后期。由胚珠横径和重量生长曲线看出:生长旺盛期出现在花后15d到50d,直至55d基本趋缓。
(2)整个发育过程中,正常胚珠中ABA、IAA、GA3含量5d时达到峰值,随后呈下降趋势,但IAA和GA3含量在30~70d有所回升,败育胚珠中ABA含量在胚胎发育后期持较高水平,IAA和GA3含量则降到最低点。败育胚珠中ABA/(IAA+GA3)始终高于正常胚珠。
(3)对不同胚龄的幼胚进行离体培养挽救试验,结果表明:荚果用70%乙醇浸泡60s,灭菌效果最佳,污染率降至8.4%;胚珠的适宜离体培养时期为授粉后30d,即败育率最低和胚珠生长最旺盛时期,萌动率为47.7%;适宜萌动培养基为Nitsch+6-BA0.5mg/L+IBA 2mg/L+GA3 0.5m/L,萌动率最高达63.6%;幼胚诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D 3.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L,诱导率为38.6%;较好的分化培养基为MS+BA 3.0m∥L+NAA 0.5m∥L+KT 3.0m∥L,初步诱导出了不定芽,分化率最高为16%;愈伤组织切片结果表明,四倍体刺槐幼胚愈伤组织的增殖生长以内起源为主。
(4)四倍体刺槐种子有胚率在37.77%,归纳为6类畸形胚,畸形种胚率92.31%,;四倍体和二倍体刺槐种胚在可溶性蛋白含量、丙二醛含量、过氧化物酶活性及种胚活力方面存在明显差异,而且种胚萌发的条件与其密切相关。通过倍性鉴定发现有活力的实生胚仍然是四倍体。
(5)对成熟种子和种胚进行了离体培养挽救试验,结果表明:经10%H2O2 24h、5mg/L GA3 6h、7mg/L NAA 6h,处理后接种到MS或1/2MS培养基上,平均萌发率为5.5%、最高达6.0%。成熟种胚接种到培养基上,7d后有小部分种子胚萌发。