哮喘发生机制及葛根素干预研究

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目的1.构建过敏性支气管哮喘大鼠模型。2.在哮喘大鼠第一次哮喘发作前给予药物干预,探讨葛根素对大鼠实验性哮喘有无预防作用。3.在哮喘大鼠第一次哮喘发作后给予药物干预,探讨葛根素对大鼠实验性哮喘有无治疗作用。方法1.将20只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组和哮喘模型组。哮喘模型组采用OVA(ovalbumin,卵清蛋白)+氢氧化铝凝胶致敏3次后,OVA激发1次建模,正常对照组以NS(normal saline,生理盐水)为替代品致敏和激发。建模后通过观察大鼠行为学改变,检测BALF(broncho-alveolar lavage fluid,支气管肺泡灌洗液)中炎性细胞构成,肺组织病理学,细胞因子水平,血流变,动脉血气,凝血四项等对模型建立成功与否进行评价。2.将50只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为5个实验组,分别为正常对照组,哮喘对照组,哮喘PUE(puerarin,葛根素)预防组,哮喘PUE+DEX预防组,哮喘DEX(dexamethasone,地塞米松)预防组。除正常对照组外,其余各组大鼠分别于第0、7、14天腹腔注射OVA+氢氧化铝凝胶混合物1ml致敏;第21天将大鼠用乙醚麻醉后气道内滴入1%的OVA200μl进行激发。正常对照组:以NS为替代品进行致敏和激发。自第15天至第20天,各组大鼠分别接受以下干预:①正常对照组:1ml NS灌胃+1ml NS腹腔注射;②哮喘对照组:1ml NS灌胃+1ml NS腹腔注射;③哮喘PUE预防组:100mg/kg葛根素灌胃+1ml NS腹腔注射;④哮喘PUE+DEX预防组:100mg/kg葛根素灌胃+0.5mg/kg地塞米松腹腔注射;⑤哮喘DEX预防组:1ml NS灌胃+0.5mg/kg地塞米松腹腔注射。第22天处死大鼠,检测各组大鼠炎症指标(BALF中炎症细胞计数、肺组织病理学、炎症因子等)及凝血指标(凝血四项及外源性、内源性凝血因子活性等)的改变,评价葛根素对大鼠实验性哮喘有无预防作用及其疗效。3.将50只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为5个实验组,分别为正常对照组,哮喘对照组,哮喘PUE治疗组,哮喘PUE+DEX治疗组,哮喘DEX治疗组。除正常对照组外,其余各组大鼠分别于第0、7、14天腹腔注射OVA+氢氧化铝凝胶混合物1ml致敏;第21天将大鼠用乙醚麻醉后气道内滴入1%的OVA200μl进行激发;第28天将大鼠用乙醚麻醉后气道内滴入0.5%的OVA200μl激发。正常对照组:以NS为替代品进行致敏和激发。自第22天至第27天,各组大鼠分别接受以下干预:①正常对照组:1ml NS灌胃+1ml NS腹腔注射;②哮喘对照组:1ml NS灌胃+1ml NS腹腔注射;③哮喘PUE治疗组:100mg/kg葛根素灌胃+1ml NS腹腔注射;④哮喘PUE+DEX治疗组:100mg/kg葛根素灌胃+0.5mg/kg地塞米松腹腔注射;⑤哮喘DEX治疗组:1ml NS灌胃+0.5mg/kg地塞米松腹腔注射。第29天处死大鼠,检测各组大鼠炎症指标(BALF中炎症细胞计数、肺组织病理学、炎症因子等)及凝血指标(凝血四项及外源性、内源性凝血因子活性等)的改变,评价葛根素对大鼠实验性哮喘有无治疗作用及其疗效。结果1.大鼠哮喘模型观察:与正常大鼠相比,哮喘大鼠BALF中总细胞计数及嗜酸细胞百分比(P<0.01,P<0.01)显著增高,肺组织病理切片,炎症因子(TNF-α(P<0.01)、IFN-γ(P<0.01)),血气分析(PaO2(P<0.05)、SaO2(P<0.05))等均有显著的改变。2.葛根素对大鼠过敏性哮喘预防作用观察:在炎症指标方面,葛根素能够有效的减轻哮喘大鼠气道炎症(BALF中总细胞计数及嗜酸细胞百分比(P<0.01,P<0.01),肺组织病理学改变显著减轻,血清IL-10水平升高,肺组织IL-10mRNA基因表达上调),但效果不及地塞米松;在凝血指标方面,葛根素能够有效的纠正哮喘大鼠凝血平衡紊乱(PT(P<0.01), TT(P<0.05), FIB(P<0.01);FII(P<0.01), FV(P<0.05), FVII(P<0.05), FX(P<0.05), FVIII(P<0.01), FIX(P<0.05),FXII(P<0.05)),显著下调FVII mRNA基因表达水平(P<0.01),且效果优于地塞米松。3.葛根素对大鼠过敏性哮喘治疗作用观察:在炎症指标方面,葛根素能够有效的减轻哮喘大鼠气道炎症(BALF中总细胞计数及嗜酸细胞百分比(P<0.01,P<0.01),肺组织病理学改变显著减轻,血清IL-10水平升高,肺组织IL-10mRNA基因表达显著上调(P<0.01)),但效果不及地塞米松;在凝血指标方面,葛根素能够有效的纠正哮喘大鼠凝血平衡紊乱(PT(P<0.01), TT(P<0.05), FIB(P<0.05);FII(P<0.05), FVII(P<0.05), FX(P<0.05), FVIII(P<0.01), FXII(P<0.01)),显著下调FVII mRNA基因表达水平(P<0.01),且效果优于地塞米松。结论1.本实验成功的建立了过敏性哮喘大鼠模型;2.葛根素能够有效地预防大鼠过敏性哮喘;3.葛根素能够有效地治疗大鼠过敏性哮喘。
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