论文部分内容阅读
目的1.使用无血清培养基体外分离扩增子宫内膜间充质干细胞,研究其生物学特性。2.判断粒细胞巨噬细胞刺激因子对子宫内膜间充质干细胞体外增殖的影响。3.建立子宫结合带干细胞的分离培养及鉴定方法。方法1.比较在无血清培养基中和含10%的胎牛血清培养基中子宫内膜间充质干细胞细胞形态细胞表型、增殖能力、细胞活率和分化能力等生物学特性。2.将术中取得的子宫内膜用胰酶和胶原酶Ⅰ进行消化、培养、扩增。将细胞培养至第三代后,分别将细胞经不同浓度的GM-CSF(Ong/ml, lng/ml,10ng/ml,100ng/ml)培养,采用倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞仪进行表型分析、活率判断、周期分析,通过CCK-8判断其生物学生长特性,并在体外诱导其成脂、成骨、成软骨分化。将子宫结合带进行分离、培养、鉴定。3.将手术中无菌取得的子宫内肌层即子宫结合带用胰酶和胶原酶Ⅰ进行消化、培养、扩增。采用倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞仪进行表型分析及存活率判断,CCK-8法判断其生长特性,并在体外诱导其成脂、成骨、成软骨分化。结果第一部分1.无血清培养基培养的子宫内膜间充质干细胞和有血清培养的子宫内膜间充质干细胞形态相似,但是前者呈明显的漩涡状生长,更加细长,立体感更强。2.无血清和有血清培养的子宫内膜问充质干细胞表面标志物均呈阳性。3.无血清培养的子宫内膜间充质干细胞细胞活率更高；细胞增殖能力更强。第二部分1.从EnMSCs的生长密度来看,随着GM-CSF浓度升高,接种同等密度的EnMSCs在接种24h和48h细胞密度差异不大,但是96h时不同浓度的GM-CSF下培养的EnMSCs细融合度产生了明显差异。2.从EnMSCs活率来看随着GM-CSF浓度升高,EnMSCs活率呈上升趋势,在浓度为lOng/ml时,EnMSCs;舌率最高,但是差异没有统计学意义(P>0.05)。3.自EnMSCs培养第3d开始,不同浓度的GM-CSF对EnMSCs的增殖产生了不同的变化,且有明显的统计学差异(P<0.05)。第三部分1.所获细胞传代后能迅速贴壁,呈长梭形；流式细胞仪检测结果显示,表面标志物CD90、CD73、CD105、CD29、CD44、CD13、CD166、HLA-ABC呈阳性表达,而CD34、CD45、CD14、HLA-DR、CD19呈阴性表达。2.CCK-8生长曲线呈S形。3.诱导分化实验结果显示,子宫结合带干细胞具有成脂、成骨和成软骨的分化能力。结论1.无血清培养基能够在体外扩增子宫内膜问充质干细胞,并使得其生物学特性更优于胎牛血清培养的子宫内膜间充质干细胞,且分化能力无改变。2.GM-CSF对EnMSCs的增殖能力有明显的促进作用,并且随着GM-CSF的浓度的增高呈递增趋势。3. uJZSCs具有很强的增殖扩增能力,可作为间充质干细胞的来源。