转仙客来热激蛋白HSP21.4基因香石竹植株耐热性研究

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香石竹(Dianthus caryophyllus L.),又名康乃馨(carnation),世界四大切花之观赏价值极高,在国际花卉市场销量非常大。原产地中海地区,喜阴凉干燥,耐热性差,夏季高温严重影响切花品质,因此培育耐热品种是香石竹的重要育种目标之一。本研究以香石竹为材料,通过根瘤农杆菌介导法将CpHSP21.4基因转入香石竹,经过抗性筛选、PCR检测,得到转CpHSP21.4基因植株,并对高温胁迫下转基因植株和对照的生理生化指标变化进行了初步研究。主要研究结果如下:1.香石竹5个品种高频再生体系的优化以香石竹无菌苗为材料,优化了香石竹5个品种‘想向’、‘娃娜’、‘安静’、‘华尔兹’、‘火星’的再生体系。结果表明,叶片比茎段不定芽的分化率高,且不定芽生长状态好,幼叶比老叶不定芽的分化率高;叶片在添加不同浓度NAA和BA组合、TDZ激素培养基中的分化率差异显著,在含0.15mg/L TDZ的培养基中分化率高。不同基因型香石竹叶片分化率存在差异,‘想向’的不定芽分化率最高,可达67.0%;‘火星’的分化率最低,只有26.7%。在腋芽增殖过程中,以MS+0.5mg/L NAA+0.5mg/L BA为最佳培养基,增殖系数高达4。2.香石竹5个品种的遗传转化将香石竹叶片接种于分化培养基上预培养2d,放入农杆菌菌液中侵染8-12min,在MS+0.15mg/L TDZ+100mmol/L AS培养基上共培养3d,转入MS+0.15mg/LTDZ+4mg/L Hyg+400mg/L Cef选择培养基上继续培养。每3周继代1次,抗性芽长度达1cm左右时,要及时转入MS+0.1mg/L NAA±4.0mg/L Hyg+生根培养基生根。不同品种抗性芽分化率有较大差异,‘想向’最高,可达17.8%,其次是‘华尔兹’11.2%;而‘火星’没有抗性芽的分化。抗性芽提取DNA后,进行PCR检测,16个株系呈阳性。3.转CpHSP21.4基因的香石竹幼苗对高温胁迫的抗性将转基因香石竹盆栽苗和对照置于36℃高温胁迫下8天,于胁迫的第0、2、6、8天分别剪取叶片,测定部分生理、生化指标的变化。结果显示:随着胁迫时间的延长,转基因幼苗叶片中可溶性蛋白质高于对照,但4d同时最高值出现在胁迫处理后的第4d;转基因幼苗叶片中可溶性糖含量、SOD活性高于对照;转基因幼苗叶片中丙二醛含量超过对照,但后期丙二醛含量上升的速度要低于对照。
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