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倍他米松是一种肾上腺皮质激素类药物，有较强抗炎、抗过敏和抗休克的功效。在畜牧业生产中，由于倍他米松可以提高饲料转化率，促进畜禽生长，因此得到了广泛的应用，进而为畜产品加工的安全问题产生不良影响。人体通过动物性食品摄入过量的倍他米松可导致代谢紊乱、血压增高、骨质疏松等，可能会给儿童的正常生长带来较严重的不利后果。因此建立动物性食品中倍他米松快速检测法有很强的现实意义。本研究采用生物化学基本理论合成免疫原，免疫动物产生抗体，建立ELISA分析方法，并且对方法的特异性、灵敏度、准确性等进行了评价，并通过HPLC方法进行了确证，具体研究结果如下: 倍他米松抗体的制备:倍他米松(BET)与琥珀酸酐进行反应，后采用活化酯法与牛血清蛋白(BSA)偶联制备免疫原、与卵清蛋白(OVA)偶联制备包被原，通过紫外扫描和SDS-PAGE法判定偶联取得成功;免疫动物获得抗血清，经ProteinA-Sepharose4B方法对抗血清进行纯化得到多克隆抗体;间接竞争ELISA测定其滴度为102400、IC15为6.60×10-5ng/mL和IC50为0.97ng/mL。 ELISA方法的建立及其稳定性的验证:通过对抗原抗体反应浓度、缓冲盐浓度、pH值、酶标抗体的浓度等条件进行分析，确定了建立ELSIA分析方法的试验条件为:包被抗原及抗体工作浓度分别为10μg/mL、纯化抗体稀释倍数为12800倍，缓冲盐溶液的pH值为7.5，甲醇浓度范围是0％～20％，辣根过氧化物酶标羊抗兔的使用浓度为稀释2500倍;板间变异系数范围为6.77％～28.01％，变异系数随倍他米松浓度的增大而减小，但平均变异系数为14.27％，在允许范围内，说明其稳定性较好。 抗体特异性验证:选取倍他米松结构类似物地塞米松、氢化可的松、醋酸氟轻松做交叉反应，其交叉反应率依次是2.51％、4.16％和0.25％。 样品基质影响的消除:在样品基质影响消除试验中，采用直接稀释法;针对猪肉、牛肉等肌肉样本和牛奶样本，经简单提取离心后，上清液用PBS缓冲液20倍稀释，即可消除基质的影响;针对肝脏样本的基质，上清液用PBS缓冲液40倍稀释，即可降低色素的影响，消除基质的干扰。提取液稀释后的标准曲线与标准曲线的对比，吻合程度高。 方法确证性试验:本试验以中国药典所采用的方法为基础，建立了分离检测倍他米松的高效液相色谱法;在一定的状态下对猪肉、牛肉以及虾肉等实行加标回收测试，结果各组分回收率分别在72.73％～93.06％之间，ELISA检测结果与HPLC检测结果有较好的相关性y=1.033x-1.057R2=0.980，说明ELISA分析方法效果良好。 综上所述，本试验成功制备出抗BET抗体;确定了建立ELSIA分析方法的试验条件;验证了抗BET抗体具有较高的特异性;对ELISA方法进行了确证性试验，结果表明建立的ELISA分析方法对样品检测的最终数据是精准的，方法可行，灵敏度较高。