【摘 要】
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第一部分:MicroRNA-335-5p在胰腺癌组织中的表达情况及其对胰腺癌细胞生物学行为的影响。目的:分析microRNA-335-5p在胰腺癌组织中的表达情况及其与临床预后的关系。探讨microRNA-335-5p对胰腺癌细胞系As PC-1增殖、迁移及侵袭的影响。方法:（1）通过公共数据库GEO和TCGA分析胰腺癌组织和正常组织中microRNA-335-5p的差异表达情况以及表达量与预后的
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第一部分:MicroRNA-335-5p在胰腺癌组织中的表达情况及其对胰腺癌细胞生物学行为的影响。目的:分析microRNA-335-5p在胰腺癌组织中的表达情况及其与临床预后的关系。探讨microRNA-335-5p对胰腺癌细胞系As PC-1增殖、迁移及侵袭的影响。方法:（1）通过公共数据库GEO和TCGA分析胰腺癌组织和正常组织中microRNA-335-5p的差异表达情况以及表达量与预后的相关性。（2）通过CCK8实验、Ed U细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭等功能实验观察过表达或抑制microRNA-335-5p表达后对胰腺癌细胞As PC-1的影响。结果:（1）通过分析GEO中的数据集GSE71533和公共数据库TCGA显示,胰腺癌组织中microRNA-335-5p的表达量与正常组织相比显著下调（p＜0.001）,并且microRNA-335-5p高表达的胰腺癌患者总生存时间明显长于低表达的患者（p＜0.001）。（2）功能实验表明,microRNA-335-5p模拟物能够显著抑制胰腺癌细胞As PC-1增殖、迁移和侵袭的能力（p＜0.01）;microRNA-335-5p抑制物则能促进癌细胞的恶性生物学行为（p＜0.01）。结论:（1）通过数据库GEO和TCGA分析显示,microRNA-335-5p在胰腺癌组织中显著低表达,并且低表达的microRNA-335-5p与胰腺癌患者不良预后相关。（2）MicroRNA-335-5p在胰腺癌细胞As PC-1增殖、迁移和侵袭方面发挥重要抑制作用。第二部分:MicroRNA-335-5p通过HOXD8调控胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究。目的:寻找microRNA-335-5p的靶基因并进行验证,揭示microRNA-335-5p调控胰腺癌细胞系As PC-1增殖、迁移及侵袭的潜在分子机制。方法:（1）利用生物信息分析网站（Target Scan、miRDB、DIANA）预测microRNA-335-5p靶基因。（2）运用双荧光素酶报告实验验证microRNA-335-5p与靶基因HOXD8的靶向关系。（3）Western blot和q RT-PCR实验检测microRNA-335-5p表达对靶基因HOXD8蛋白质和m RNA水平的影响。（4）相关功能实验观察抑制HOXD8表达对胰腺癌细胞As PC-1增殖、迁移和侵袭能力的影响。（5）根据rescue实验策略对胰腺癌细胞As PC-1在增殖、迁移和侵袭能力相关功能实验进行验证,以揭示microRNA-335-5p潜在的分子机制。结果:（1）根据Target Scan、miRDB、DIANA信息筛选得到40个候选靶基因,其中HOXD8在三个生物信息分析库中综合得分最高,因此选择HOXD8进一步实验。（2）双荧光素酶报告实验显示,microRNA-335-5p直接靶向HOXD8（p＜0.001）。（3）通过q RT-PCR及western blot实验发现,抑制microRNA-335-5p后可显著增加HOXD8 m RNA及蛋白的表达（p＜0.01）。（4）功能实验表明,敲减HOXD8能够显著抑制胰腺癌细胞As PC-1增殖、迁移和侵袭的能力（p＜0.01）。（5）挽救实验表明,敲减HOXD8后可以减弱microRNA-335-5p抑制物对胰腺癌细胞As PC-1的促癌作用（p＜0.01）。结论:（1）HOXD8是microRNA-335-5p的靶基因之一,并且microRNA-335-5p通过负性靶向调控基因HOXD8的表达。（2）抑制HOXD8表达可以显著降低胰腺癌细胞As PC-1生长增殖、迁移和侵袭的能力。（3）MicroRNA-335-5p通过靶向调控HOXD8基因表达进而抑制胰腺癌细胞As PC-1的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。
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