肿瘤相关巨噬细胞通过NF-κB通路促进食管癌细胞迁移侵袭

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目的:  食管癌是世界上常见的恶性肿瘤之一,位列癌症死亡病因的第6位。食管癌患者就诊时常常并发肿瘤侵袭转移,这也是食管癌致死率居高不下的原因之一。肿瘤微环境与肿瘤侵袭转移存在密切联系,而M2型巨噬细胞是肿瘤微环境的主要构成成分,称之为肿瘤相关巨噬细胞(TAMs),能促进肿瘤的发生发展。在胃癌、乳腺癌和口腔鳞癌等肿瘤当中都已证实TAMs与肿瘤细胞的分化生长侵袭转移成正相关,与预后成负相关。已有研究表明在食管癌组织中巨噬细胞浸润密度较癌旁正常组织明显增加,但其对食管癌的具体作用机制未见阐明。另一方面,核转录因子κB(NF-κB)可以通过调控钙黏蛋白、MMPs等粘附因子促进肿瘤细胞的迁移侵袭。因此,本实验将探讨TAMs对食管癌侵袭转移的影响和分子机制,以及NF-κB在其中的地位,为临床食管癌治疗提供潜在的靶点及新的理论依据。  方法:  ⑴用含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的RMPI-1640培养基培养人单核细胞株THP-1。用含10%胎牛血清、100U/ml链霉素和100U/ml青霉素的DMEM培养基培养人食管鳞癌细胞株EC109。⑵采用佛波酯(PMA)和IL-4体外刺激THP-1,诱导分化为M2型巨噬细胞,观察细胞形态学改变,用流式细胞术检测巨噬细胞膜分子CD204和CD206的表达,鉴定M2型巨噬细胞是否诱导成功。⑶设空白对照组、TAMs组、BAY11-7082(NF-κB抑制剂)处理组、BAY11-7082处理+TAMs组,用transwell小室及BD Matrigel Invasion Chamber小室分别检测TAMs及经NF-κB抑制剂预处理对食管癌细胞迁移、侵袭能力的影响。⑷设空白对照组、TAMs共培养组、BAY11-7082处理组、BAY11-7082处理组+TAMs共培养组,用 western blot检测 TAMs共培养及经 NF-κB抑制剂预处理对食管癌细胞NF-κB、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2及MMP-9蛋白表达水平的影响。  结果:  ①THP-1细胞经PMA和IL-4刺激后,细胞贴壁成簇生长,部分细胞伸出伪足,CD204和CD206表达增加,说明M2型巨噬细胞(TAMs)诱导成功。②TAMs可促进食管癌细胞株EC109的迁移和侵袭能力,而BAY11-7082逆转了TAMs的作用。③TAMs可上调EC109细胞的NF-κB蛋白表达,BAY11-7082可阻断该作用。④TAMs可诱导EC109细胞N-cadherin、MMP-2、MMP-9的蛋白表达,抑制E-cadherin的表达。而BAY11-7082可削弱TAMs对EC109细胞侵袭转移相关蛋白的调控作用。  结论:  TAMs可能通过活化食管鳞癌细胞株EC109的NF-κB信号通路,诱导N-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达,下调E-cadherin蛋白水平,进而促使其迁移侵袭。
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