本文通过γ-氯丙基三甲氧基硅烷的媒介，将聚乙烯亚胺(PEI)化学偶联在硅胶微粒表面，制备了新型复合载体PEI/SiO2，最终制得了活性高且稳定性好的固定化青霉素酰化酶。通过红外光谱、电导滴定对复合载体表面的化学结构与组成进行了表征；通过测定复合载体表面PEI的偶合量，考察了各种反应条件对复合载体制备的影响规律，实验所得偶联反应的适宜条件为：反应温度90～94℃；反应时间5h；PEI水溶液浓度为45g/100mL～50g/100mL；聚乙烯亚胺水溶液与氯丙基化硅胶质量比为5：1。在实施酶的固定化过程中，考察了戊二醛用量、pH值、固定化温度、固定化时间以及给酶量等条件对固定化青霉素酰化酶表观活力、活力回收率等性能的影响，实验所得最优固定化条件为：0.5g表面键合有9％PEI的复合载体，使用1％的戊二醛，在pH值为7.92缓冲溶液中，酶液用量0.05mL，于30℃下进行14～15h的固定化反应，所制固定化酶的活力为118U/g，活力回收率为46％。结合复合载体在固定化酶前的ξ电位及酶固定化反应过程的特点，探索了复合载体PEI/SiO2固定化酶的作用机理。研究结果表明：复合载体PEI/SiO2表面带有大量的胺基，通过化学键合(胺基的Schiff反应)与物理吸附(质子化胺基与酶分子的静电吸引作用)两种作用将酶分子快速、高效地固定在载体上，充分地保持了酶分子的构象，获得了较高活性的固定化酶。为了考察所制固定化酶的性能，测定了游离酶与固定化酶催化反应的最适pH值、最适温度、固定化酶的连续操作稳定性、二者对金属离子的耐受性能及米氏常数。实验结果表明：游离酶和固定化酶催化反应的最适pH值分别为9.32和7.34，最适温度分别为50℃和40℃，固定化酶具有良好的连续操作稳定性，且比游离酶具有较好的抗金属离子性能；二者的米氏常数分别为2.38×10-1mol/L和5.44×10-2mol/L。