阪崎肠杆菌Enterobacter sakazakii, E. sakazakii)是较常见的条件致病菌,通常寄生于动物以及人体肠道中,它对成人危害不大,但对婴幼儿,特别是新生儿危害非常大,能引起对新生儿致命的疾病,研究表明,婴幼儿配方奶粉是阪崎肠杆菌主要传播媒介,对阪崎肠杆菌更好的快速检测技术是对该菌及其所致疾病进行更高效、确实的监督、监管和及时确诊的迫切需求。电化学免疫传感器是将生物酶高效的化学放大、电化学分析的高灵敏性及免疫物质的专一识别等特性相结合的一种分析技术,该技术具有快速、灵敏度高、耗费少等优点,应用潜力非常大,近年来已成为快速检测抗原类物质的一项重要研究领域。应用新型纳米材料如纳米金(gold nanoparticles, AuNPs)、多壁碳纳米管(Multi-wall carbon nanotubes, MWCNTs)等制备的新型免疫传感器有望促进和完善该项技术。为了研究及改善新型电化学免疫传感器,并将其应用于对E. sakazakii的快速检测,本论文主要围绕以下几个方面开展研究工作：1基于电沉积纳米金/硫堇阪崎肠杆菌免疫传感器的研究本文旨在研制基于电沉积纳米金新型快速检测阪崎肠杆菌的免疫传感器。首先通过电沉积将纳米金固定到丝网印刷碳电极上,然后依次将硫堇、辣根过氧化物酶标记阪崎肠杆菌抗体通过自组装固定到纳米金修饰的丝网印刷碳电极,制得一种基于纳米金／硫堇快速检测阪崎肠杆菌的免疫传感器。分别采用循环伏安法(CV)和交流阻抗法(EIS)对不同修饰步骤制备的电极进行电化学特性表征,根据循环伏安法还原峰电流值在抗体抗原特异性结合前后的变化差值来实现对E.Sakazakii的快速检测。在优化的实验条件下,使用该新型免疫传感器对E.Sakazakii进行检测,确定其检测线性范围为103～109cfu/mL,最低检出限达到6.9×101cfu/mL (S/N).该新型免疫传感器具有良好的重现性(RSD=.6%)、稳定性(在4℃无菌密闭环境下保存30d后,免疫电极CV还原峰电流值为初始CV值的90.3%),且灵敏度高、特异性好,具有一定的应用前景,并可为其他致病菌免疫传感器的构建提供参考模型。2基于多壁碳纳米管/羧甲基壳聚糖-海藻酸钠/硫堇阪崎肠杆菌免疫传感器的研究研究基于多壁碳纳米管/羧甲基壳聚糖-海藻酸钠/硫堇新型免疫传感器,并将其应用于对E.Sakazakii的快速检测。首先利用羧甲基壳聚糖-海藻酸钠复合物将多壁碳纳米管包埋固定于丝网印刷碳电极上,然后通过自组装依次将硫堇、辣根过氧化物酶标记阪崎肠杆菌抗体固定到修饰了多壁碳纳米管的电极上,制得一种电化学响应信号显著增大和改善的免疫电极。分别采用交流阻抗法(EIS)和循环伏安法(CV)对不同修饰步骤制备的电极进行电化学特性表征,根据循环伏安法还原峰电流在抗体抗原特异性结合前后的变化差值对E.Sakazakii的浓度进行测定。在优化的实验条件下,使用该新型免疫传感器对E.Sakazakii进行检测,确定其检测线性范围为103～109cfu/mL,最低检出限达到6.6×101cfu/mL (S/N),该新型酶免疫传感器具有良好的重现性(RSD=6.3%)、稳定性(免疫电极在4℃无菌密闭环境下保存30d后,CV还原峰电流值仍能达到初始值的92.3%),且灵敏度高、特异性好。该新型免疫传感器具有良好的应用前景并可为其它致病菌的检测提供参考。3基于多壁碳纳米管-壳聚糖/硫堇/纳米金阪崎肠杆菌免疫传感器的研究本研究旨在构建一种基于多壁碳纳米管和纳米金的新型免疫传感器并将其应用于E.Sakazakii的快速检测。首先将壳聚糖分散过的多壁碳纳米管固定于丝网印刷碳电极上,然后自组装固定硫堇,再利用纳米金与氨基的吸附作用依次自组装上纳米金、辣根过氧化物酶标记阪崎肠杆菌抗体,制备成快速检测阪崎肠杆菌的新型免疫电极。采用交流阻抗法(EIS)和循环伏安法(CV)分别对不同修饰步骤制备的电极进行电化学特性表征,根据循环伏安法还原峰电流值在抗体抗原特异性结合前后变化的差值对E.Sakazakii进行定性定量测定。在优化的实验条件下,使用该新型免疫传感器对E.Sakazakii进行检测,获得的检测线性范围为102～109cfu/mL,最低检出限达到7.6×101cfu/mL(S/N)。该新型免疫传感器具有良好的重现性(RSD=7%)、稳定性(免疫电极在4℃无菌密闭环境下保存30d后,响应CV还原峰电流值仍能达到初始值的94.5%),且灵敏度高、特异性强,具有潜在的应用价值,也可为其他抗原类物质免疫传感器的构建提供参考模型。