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第一部分Icariin对脂肪干细胞(ASCs)的增殖和成骨分化的影响目的:探究活性小分子淫羊藿苷(icariin)是否具有促进脂肪干细胞(ASCs)的增殖和成骨分化的潜能,并确定其促ASCs增殖和分化的最适浓度,为后续研究打下基础方法:1分离大鼠脂肪组织,I型胶原酶消化分解法获得ASCs2不同浓度的icariin(0mol/L 10-8mol/L 10-7mol/L 10-6mol/L 10-5mol/L)干预脂肪干细胞,用CCK8 PCR WESTREN BLOT等方法检测其对ASCs增殖的影响3不同浓度的icariin(0mol/L 10-8mol/L 10-7mol/L 10-6mol/L 10-5mol/L)干预脂肪干细胞,检测其对ASCs成骨相关基因表达的影响结果:1、分离的ASCs形态均一,呈长梭形并有多个触手伸出2、CCK8 PCR WESTREN BLOT方法检测发现icariin对ASCs促增殖作用具有浓度依赖性,在10-7mol/L效果最好3、RT-PCR检测成骨相关基因的表达发现,icariin能够促进成骨相关基因的表达,且对分化的影响具有浓度依赖性结论:icariin可促进ASCs增殖和成骨分化,效果与药物浓度相关第二部分Icariin影响脂肪干细胞YAP表达和亚细胞定位目的:探究icariin促进ASCs的增殖和成骨分化的分子机制方法:1、研究icariin对ASCs中YAP的胞核和胞质定位的影响2、研究不同浓度的icariin(0mol/L 10-8mol/L 10-7mol/L 10-6mol/L10-5mol/L)对YAP及其下游相关基因的表达的影响3、最适浓度的icariin干预ASCs不同的时间,探究icariin对YAP的磷酸化及其下游基因的表达情况结果:1、荧光显微镜观察显示icariin干预组中YAP的表达和胞核聚集明显增加对照组的YAP也主要聚集在胞核之中2、Icariin对ASCs的YAP通路的影响与浓度相关在10-7M浓度时YAP TAZ及其下游CTGF表达最高,浓度高于10-7M时表达反而下降3、Icariin可使YAP去磷酸化结论:icariin可促进YAP的表达和去磷酸化,使YAP胞核聚集而引起下游基因的第三部分Icariin诱导三维立体培养的ASCs在大鼠骨缺损的修复中的研究目的:研究icariin与生物玻璃中三维培养的ASCs在大鼠颅骨极量骨缺损模型的修复中的效果方法:1、在大鼠颅骨顶制做直径为8mm的极量骨缺损模型2、生物玻璃作(BG)为生物支架材料,与ASCs混合培养,然后在体外用icariin干预3、将icariin-BG-ASCs填入骨缺损观察其修复效果结果:1、大鼠颅骨缺损模型为直径8mm的圆形缺损,在正常情况下其不会修复2、生物玻璃为疏松孔隙样,ASCs在其中生长良好3、体内试验证实Icariin可促进颅骨缺损的恢复结论:ASCs在生物玻璃支架中生长良好,icariin可明显促进3D培养的ASCs对骨缺损的修复。