【摘 要】
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背景:卵巢癌是全球第三大常见妇科恶性肿瘤,死亡率居于妇科肿瘤的首位。目前关于卵巢癌的治疗方法在不断发展,但当前的治疗策略对患者的预后以及生存未产生明显的改善,主要是与其起病隐匿,极易发生转移,且复发和耐药的风险依旧很大相关。激肽释放酶相关肽11（KLK11）是KLK家族的成员之一,最初是从人海马c DNA中克隆出来的,曾命名为类胰蛋白酶丝氨酸蛋白酶,由六个外显子组成,是一种蛋白质编码基因,与肿瘤密
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背景:卵巢癌是全球第三大常见妇科恶性肿瘤,死亡率居于妇科肿瘤的首位。目前关于卵巢癌的治疗方法在不断发展,但当前的治疗策略对患者的预后以及生存未产生明显的改善,主要是与其起病隐匿,极易发生转移,且复发和耐药的风险依旧很大相关。激肽释放酶相关肽11（KLK11）是KLK家族的成员之一,最初是从人海马c DNA中克隆出来的,曾命名为类胰蛋白酶丝氨酸蛋白酶,由六个外显子组成,是一种蛋白质编码基因,与肿瘤密切相关。目前研究表明,KLK11在结肠癌、甲状腺癌、肝细胞癌、乳腺癌等多种癌症中异常表达,且在不同肿瘤中的表达及功能不尽相同,而关于KLK11基因对卵巢癌细胞生物学行为的影响及相关机制尚不明确。本实验旨在探明KLK11基因对卵巢癌细胞生物学行为的影响,并探讨KLK11对卵巢癌细胞迁移和侵袭潜在的调控机制,为探索新的肿瘤标志物提供新的方向。目的:探究KLK11基因对卵巢癌细胞恶行生物学行为的影响及相关机制。方法:本实验利用TCGA数据库（The Cancer Genome Atlas Program）分析KLK11基因在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的表达情况。体外培养正常卵巢上皮细胞（IOSE80）和人卵巢癌细胞（A2780、SKOV-3、HO8910）。通过实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测卵巢癌细胞株中KLK11 m RNA表达水平,Western blot检测KLK11蛋白在卵巢癌细胞系中的表达水平。运用小干扰RNA（si RNA）特异性抑制KLK11基因在卵巢癌细胞株中的表达,q RT-PCR及Western blot评估KLK11的下调效率。采用CCK-8、划痕及transwell检测KLK11对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,流式细胞术检测KLK11对卵巢癌细胞凋亡的影响。Western blot检测KLK11对E-cadherin、Vimentin、Snail等EMT相关蛋白表达水平的影响。结果:1、卵巢癌中KLK11基因表达上调:（1）TCGA数据库分析结果显示,卵巢癌组织中KLK11表达水平上调（P＜0.001）;（2）q RT-PCR检测结果显示,卵巢癌细胞A2780、SKOV-3及HO8910中KLK11基因的m RNA表达量,均高于正常卵巢上皮细胞IOSE80（P＜0.001）;（3）Western blot检测结果显示,卵巢癌细胞A2780、SKOV-3及HO8910中KLK11基因的蛋白表达量,均高于正常卵巢上皮细胞IOSE80（P＜0.001）。2、si-KLK11-3下调KLK11基因表达的效率最高:（1）小干扰RNA特异性转染卵巢癌细胞株,24小时后q RT-PCR检测结果显示,与Control组对比,si-KLK11-1、si-KLK11-2、si-KLK11-3组SKOV-3和HO8910细胞的m RNA表达均降低,其中si-KLK11-3组下调效率更明显（P＜0.001）;（2）小干扰RNA特异性转染卵巢癌细胞株,48小时后Western blot检测结果显示,与Control组对比,si-KLK11-1、si-KLK11-2、si-KLK11-3组SKOV-3和HO8910细胞的蛋白表达均降低,同样si-KLK11-3组下调效率更明显（P＜0.001）。3、下调KLK11基因抑制卵巢癌细胞的增殖:CCK-8的结果显示,与Control组对比,si-KLK11组卵巢癌细胞的增殖能力减弱,具有统计学意义（P＜0.001）。4、下调KLK11基因抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭:划痕实验及transwell实验检测结果显示,与Control组对比,si-KLK11组卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力减弱,具有统计学意义（P＜0.001）。5、下调KLK11基因促进卵巢癌细胞的凋亡:流式细胞检测结果显示:与Control组对比,si-KLK11组卵巢癌细胞的凋亡水平升高,具有统计学意义（P＜0.001）。6、下调KLK11基因影响EMT相关蛋白的表达:Western blot检测结果显示,与Control组对比,si-KLK11组SKOV-3和HO8910细胞中,E-cadherin蛋白表达水平增加,而Snail、Vimentin蛋白表达水平均下降,具有统计学意义（P＜0.001）。结论:KLK11基因在卵巢癌细胞中表达上调,下调KLK11基因后,卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力减弱,凋亡水平升高,并且卵巢癌细胞中EMT相关蛋白表达出现异常,说明KLK11基因影响卵巢癌的生物学行为,其中迁移与侵袭行为的异常可能与EMT相关蛋白有关,KLK11基因可能是卵巢癌的一个潜在生物标志物,为卵巢癌的诊断和治疗提供新的方向。
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