【摘 要】
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目的：在恶性肿瘤特异性诊断治疗中，广谱癌基因以其潜在的应用价值成已成为应用研究热点。在诊断应用中，利用单克隆抗体检测肿瘤特异抗原成为临床诊断的重要组成部分，同时应用肿瘤
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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目的：在恶性肿瘤特异性诊断治疗中，广谱癌基因以其潜在的应用价值成已成为应用研究热点。在诊断应用中，利用单克隆抗体检测肿瘤特异抗原成为临床诊断的重要组成部分，同时应用肿瘤特异性抗原激活抗原提呈细胞进行免疫治疗，也正在成为重要的肿瘤辅助治疗手段，肿瘤抗原已经成为目前的研究热点。NY-ESO-1抗原是近年发现的一种肿瘤特异性抗原，属于癌症睾丸抗原(cancer-testis antigen，CTA)家族。NY-ESO-1，在正常组织只表达于睾丸、胎盘(这些组织由于不表达MHC-Ⅰ类分子，不能成为免疫攻击的目标，属于免疫特权部位能得以免疫豁免)，在肿瘤组织中NY-ESO-1抗原广泛表达。我们通过基因克隆制备人NY-ESO-1全基因，并将其构建于表达载体PGEX-4T-2中，得到重组表达载体PGEX-4T-2／NY-ESO-1，将PGEX-4T-2／NY-ESO-1转化大肠杆菌BL21后进行诱导表达，得到的融合蛋白经纯化后进行动物免疫，制备多克隆抗体，通过建立NY-ESO-1单克隆抗体杂交瘤细胞系，制备抗NY-ESO-1单克隆抗体，确定其免疫学特性后，用于检测NY-ESO-1在乳癌中的表达，判断NY-ESO-1与乳癌的发生发展之间的关系。 方法：将人黑色素瘤NY-ESO-1重组表达载体PGEX-4T-2／NY-ESO-1(本室保存)转化的BL21大肠杆菌，通过IPTG诱导表达后，获得可溶性融合蛋白。融合蛋白经谷胱甘肽-S-转移酶亲和层析柱纯化，免疫Balb／c小鼠。用传统方法进行细胞融合后，采用本室改良的细胞筛选方法制备了鼠抗人单克隆抗体，并对得到的单克隆抗体进行了特异性、亚类和亚型等的鉴定。对乳癌组织进行免疫组化，检测NY-ESO-1的蛋白表达并进行统计。 结果：成功诱导表达PGEX-4T-2／NY-ESO-1转化的BL21大肠杆菌，得到纯度＞90％的GST-NY-ESO-1蛋白，进行牛凝血酶切割后，得到纯化的NY-ESO-1蛋白。成功免疫Balb／c小鼠，得到血清效价1：20000的小鼠。进行传统细胞融合后，进行ELISA筛选，筛选
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