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背景与目的:创伤后应激障碍(PTSD)是指遭受严重身体或心理创伤后出现的精神心理障碍综合征。近年来随着自然灾害、社会暴力、工作生活压力的不断增多,PTSD的发病率呈逐年增高趋势。既往文献报道,在PTSD应激状态下存在着广泛的内脏敏感性改变—中枢痛觉敏化/去敏化现象,而内脏高敏感是功能性胃肠病(FGIDs)如肠易激综合征(IBS)最主要的发病机制之一,PTSD与IBS之间互为因果、相互促进彼此的发生。目前PTSD状态下内脏高敏感性—中枢痛觉敏化的确切分子机制尚不清楚,既往研究主要集中在大脑的海马、杏仁核、前扣带回等部位,而目前有证据表明脊髓水平中枢痛觉敏化亦发挥了重要作用,并逐渐成为了研究的重点和热点课题。谷氨酸是中枢神经系统(CNS)主要的兴奋性神经递质,通过激活谷氨酸受体发挥伤害性信息传递作用。N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2B(NR2B)亚基被谷氨酸激活后参与了多种疼痛的形成与维持。既往有学者利用内脏痛、炎性痛、神经痛大鼠模型,均证实NR2B在脊髓水平参与了痛觉敏化的调控。由于神经细胞突触间隙缺乏谷氨酸代谢酶,CNS中的谷氨酸主要依赖谷氨酸转运体-1(GLT-1)清除。在中枢痛觉敏化下,GLT-1对谷氨酸的摄取活性降低。头孢曲松(CTX)作为一种β-内酰胺类抗生素,可选择性诱发GLT-1的基因转录,上调GLT-1的表达,从而发挥抗内脏伤害性作用。NR2B、GLT-1分别作为谷氨酸能系统的重要组成部分,两者之间有着密切的联系,GLT-1可通过调控突触间隙谷氨酸的含量影响NR2B的表达,两者共同在中枢疼痛信息传递中发挥了重要作用。我们推测,在脊髓水平GLT-1、NR2B共同参与了PTSD状态下内脏敏感性—中枢痛觉敏化的形成,CTX可以通过调控GLT-1/NR2B的表达发挥抗内脏伤害性作用,为PTSD内脏高敏感关联疾病的临床防治提供了新思路。实验一PTSD状态下内脏敏感性的改变及CTX抗内脏伤害性刺激作用方法:选用成年雌性Sprague-Dwley大鼠35只,随机分为5组:正常对照组(7只):腹腔注射生理盐水;PTSD组(7只):即采用卵清蛋白(OVA)基础致敏联合单一连续应激(SPS)制作PTSD内脏高敏感大鼠模型;CTX组(7只):腹腔内注射ctx(200mg/kg)预处理,连续7天;ptsd+ctx组(7只):即ova基础致敏联合sps应激,并在sps应激后立即给予ctx(200mg/kg)预处理,连续7天;ptsd+ctx+dhk组(7只):处理同ptsd+ctx组,结直肠扩张(crd)之前1小时给予腹腔注射dhk(10mg/kg)。采用crd-内脏运动反射(vrm)技术检测内脏敏感性的改变:大鼠腹外斜肌埋置电极,在20、40、60、80mmhg梯度压力行crd,记录crd-vrm后的腹外斜肌肌电图(emg),通过计算emg曲线下面积(auc)评估ptsd状态下内脏敏感性改变。结果:在20、40、60、80mmhg各梯度压力下行crd,ptsd组的auc均显著高于正常对照组(p值均<0.05);与ptsd组比较,ptsd+ctx组在各压力水平的auc明显降低(p值均<0.01);在80mmhg行crd,glt-1抑制剂dhk可逆转ctx的抗内脏伤害作用(p<0.05)。在40、60、80mmhg下行crd时,ctx组的auc明显低于正常对照组(p值均<0.05)。结论:腹腔注射ova基础致敏联合sps可成功建立ptsd内脏高敏感大鼠模型,ptsd诱导了内脏高敏感的发生;在ptsd内脏高敏感状态下,ctx能够发挥抗内脏伤害性作用;给予glt-1特异性抑制剂dhk可逆转ctx的抗内脏伤害作用。实验二ptsd状态下脊髓glt-1表达的改变及ctx干预的影响方法:选用成年雌性sprague-dwley大鼠42只,随机分为5组:正常对照组(8只)、ptsd组(9只)、ctx组(8只)、ptsd+ctx组(10只)、ptsd+ctx+dhk组(7只),模型建立同实验一。采用免疫荧光漂染技术及激光共聚焦显微技术研究各组大鼠脊髓glt-1的表达水平变化:测量各组大鼠脊髓glt-1的免疫荧光平均光密度值(aod),表示脊髓glt-1的表达水平。结果:与正常对照组比较,ctx组脊髓glt-1表达水平显著增高(p=0.001),而ptsd组glt-1表达较正常对照组比较明显降低(p=0.001);ptsd+ctx组脊髓glt-1表达水平与ptsd组比较显著增高(p=0.004);ptsd+ctx组分别与正常对照组、ptsd+ctx+dhk组比较,差异均无统计学意义。PTSD内脏高敏感状态下GLT-1表达明显下调,但CTX可上调脊髓GLT-1的表达,从而提示在脊髓水平,GLT-1参与了PTSD状态下内脏高敏感性—中枢痛觉敏化的形成。实验三PTSD状态下CTX通过影响NR2B的表达发挥抗内脏伤害性作用的机制方法:选用成年雌性Sprague-Dwley大鼠35只,随机分为3组:正常对照组(7只)、PTSD组(7只)、PTSD+CTX组(7只),模型建立同第一部分。采用免疫荧光漂染技术及激光共聚焦显微技术,测量各组大鼠脊髓NR2B的AOD值,观察脊髓NR2B表达水平的变化。结果:与正常对照组比较,PTSD组脊髓NR2B表达显著增高(P=0.001);与PTSD组比较,PTSD+CTX组NR2B表达显著降低(P=0.001)。PTSD+CTX组与正常对照组比较NR2B表达无明显差异(P>0.05)。小结:在PTSD状态下,NR2B表达明显上调,CTX可下调NR2B的表达,提示NR2B参与PTSD状态下内脏高敏感性—中枢痛觉敏化的调控作用,CTX可能通过影响NR2B的表达发挥抗内脏伤害性效应。结论:1.腹腔注射OVA基础致敏联合SPS可成功建立PTSD内脏高敏感大鼠模型,PTSD诱导了内脏高敏感性。2.在PTSD内脏高敏感状态下,CTX通过上调GLT-1表达发挥抗内脏伤害性作用;3.脊髓水平GLT-1/NR2B参与了PTSD状态下内脏高敏感性—中枢痛觉敏化的形成;CTX直接上调GLT-1的表达、间接下调NR2B的表达联合发挥抗内脏伤害性效应。