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本实验主要对分离自云南地区土壤中13株具有除草活性放线菌进行了多相分类的研究。 本文综述了放线菌作为资源微生物的重要价值,介绍了目前微生物除草剂尤其是放线菌除草剂的种类、研究进展和发展趋势,同时介绍了当前放线菌多相分类所采用的技术方法、研究进展和新的系统发育标记及分子分类技术的应用。 本实验的第一部分对具有除草活性的13株放线菌(40001~40013)进行了系统的多相分类研究,采用了形态学、细胞化学组分、DNA G+C mol%、16S rDNA序列分析及生理生化实验等技术方法。从细胞化学组分的研究结果看,13株放线菌划分为5个类群,菌株40001~40006和40013,细胞壁I/C型,磷酸类脂PⅠ型,醌为MK-9(H4,H6,H8);菌株40007和40008,细胞壁Ⅲ/B型,磷酸类脂PⅣ型,醌为MK-9(H4,H6,H8);菌株40010和40011,细胞壁Ⅱ/D型,磷酸类脂PⅡ型,醌为MK-10(H4);菌株40009与40012各为单独小类群,40009细胞壁Ⅲ/C型,磷酸类脂PⅢ型,醌为MK-10(H4,H6),40012细胞壁Ⅲ/B型,磷酸类脂PⅣ型,醌为MK-9(H2)。 实验获得了13株放线菌16S rDNA的近乎全序列,将之与GenBank中已知序列进行比较,也可以将这13株放线菌划分为5个类群,菌株40001等7株菌与链霉菌属(Streptomyces)的菌株进化关系较近,其中菌株40004和波赛链霉菌(Streptomyces peucetius)的序列相似性为98.03%;40013与拒霉素链霉菌(Streptomyces resistomycificus)的序列相似性为99.02%。菌株40009与达氏拟诺卡菌微白亚种(Nocardiopsis dassonvillei subsp albirubida)关系最近,序列相似性达到100%。与菌株40010关系较近的是波赛小单孢菌(Micromonospora peucetica),序列相似性98.29%,与菌株40011关系较近的是棘孢小单孢菌(Micromonospora echinospora),序列相似性98.94%。菌株40012与产紫晶链孢囊菌(Streptosporangium amethystogenes)的序列相似性是99.37%。菌株40007和40008与马杜拉菌属(Actinomadura)关系较近,但序列相似性最高也只有95.43%,这两株菌可能属于新的属。 通过以上多相分类的研究,确定了13株活性放线菌的分类地位及系统发育关系。菌株40001等7株菌属于链霉菌属(Streptomyces),40009属于拟诺卡氏菌属 摘 要(NOcardopsi),40010和 400if属于小单抱菌属(Me。monospora人 40012属于魁抱囊菌属(Sp osporangium);菌株40007 和40008 与马杜拉放线菌 属(Aclinomadura)的进化关系较近,但序列相似性低于97%,可能属于新的属。 本实验的第二部分进行的是除草活性研究。经过对除草活性物质进行提取。纯化,利用薄层层析对其进行分离,发现每株菌所产生的活性物质都由多组分构成,且不同菌株的组分表现出数和量差异;进一步将单组分处理后作活性实验,发现每一组分都具有除草活性,可以在醉浆草叶片表面形成枯斑,并对双子叶杂草具有选择抑制仆用。 本实验的第三部分进行了 165-235 rDNA’。j区研究,采用特异引物进行 PCR扩增,得到长度约为500hp的片段,并获得部分序列。