基于右旋糖酐蔗糖酶的槲皮素糖基化研究

来源 :合肥工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lpve530
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黄酮类化合物广泛存在于自然界中,具有抗炎抑菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射和免疫调节等诸多活性,已成为国内外天然药物开发利用研究的热点。由于大多数黄酮苷元水相中溶解度低,限制了其制剂的开发。而糖基化修饰,在提高黄酮类化合物水溶性的同时,还可以改善其生理活性。本论文利用右旋糖酐蔗糖酶的转糖基作用,以蔗糖为葡萄糖糖基供体,槲皮素为糖基受体,对槲皮素葡萄糖苷的酶法合成进行了探索。论文首先对酶催化反应体系进行了研究,确定了30%DMSO-70%乙酸-乙酸钙缓冲液(0.02mol/L,pH=5.4)作为酶催化反应体系,在这个反应体系下,不仅维持了一定的酶活力,还解决了槲皮素溶解度较低的问题。然后是对酶催化产物的分离纯化,通过醇沉,萃取,选择AB-8大孔树脂柱和Sephadex LH-20柱相结合的工艺对槲皮素葡萄糖苷进行分离纯化,通过液相对收集到的目标产物进行检测,纯度达98%以上。接着是对酶催化反应条件的研究,通过考察反应时间、反应转速、酶活力、反应体积、蔗糖浓度对槲皮素葡萄糖苷转化率的影响。确定了酶催化合成槲皮素葡萄糖苷的最佳条件,槲皮素葡萄糖苷的转化率从28%提高到39.5%。优化后的工艺参数是:在25℃下,30%DMSO-70%缓冲液体系中,以10%的蔗糖为糖基供体,槲皮素为糖基受体,右旋糖酐蔗糖酶活力为40U/ml,转速为150r/min,反应24h,槲皮素葡萄糖苷的转化率最高,可达39.5%。最后通过质谱和核磁共振氢谱对槲皮素葡萄糖苷的结构进行了推测,确定了目标产物是一种槲皮素单糖苷,分子量是464,其最有可能的结构是槲皮素-4’-O-ɑ-D-吡喃葡萄糖苷。论文的研究结果为黄酮类物质的糖基化修饰奠定了基础。
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