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蚕蛹(Silkworm pupa)为蚕蛾科昆虫家蚕蛾(Bombyx moil L.)的蛹,为药膳同源传统中药材,具有很高的营养和药用价值。蚕蛹多糖是蚕蛹中的主要成分之一,具有增强机体免疫力的作用。目前,关于蚕蛹的研究主要集中在蚕蛹蛋白成分上,而蚕蛹多糖的相关信息很少,特别是对蚕蛹多糖的提取、分离纯化未见任何系统的报道。本文对蚕蛹多糖的提取、分离纯化进行了系统的研究,论文主要内容和结果如下:
1.采用苯酚-硫酸法测定蚕蛹多糖含量。
2.以蚕蛹为原料,采用传统热水浸提法、微波辅助提取法以及超声波辅助提取法提取蚕蛹多糖,在单因素实验的基础上,采用正交设计对蚕蛹多糖的提取工艺进行优化。
确定传统水提最佳提取工艺参数:浸提时间10 h,温度100℃,料液比1:10,多糖提取率为93.78%。
微波辅助提取最佳提取工艺参数:微波处理时间100 min,功率600 W,料液比1:15,多糖提取率为80.24%。
超声波辅助提取最佳工艺参数:超声处理时间40 min,功率750 W,料液比1:10,多糖提取率达到95.61%。比较不同提取方法,超声波辅助法提取蚕蛹多糖效果最好,明显缩短提取时间,降低能耗,提高蚕蛹多糖提取率。
3.采用不同的脱蛋白方法去除蚕蛹粗多糖中的蛋白质,并对各方法的脱蛋白工艺进行了优化,以蛋白去除率和多糖损失率为参考指标比较最佳参数下各个方法的脱蛋白效果。实验结果表明,木瓜蛋白酶-TCA联用法脱蛋白效果较好,在木瓜蛋白酶用量[E]/[S]为0.2%,酶解温度50℃的条件下酶解反应1.5 h后,采用TCA法除蛋白一次,蛋白去除率达到97.98%,多糖损失率为18.76%。
4.对蚕蛹多糖进行了初步的分离纯化。实验确定了DEAE-Sephadex A-25作为分离纯化的凝胶,对脱蛋白处理后的蚕蛹多糖进行柱层析分离,考察不同洗脱条件对蚕蛹多糖分离效果的影响。在上样量60 mg,洗脱速度0.5 mL·min-1,0~0.5 mol·L-1 NaCl溶液梯度沈脱的条件下分离蚕蛹多糖得到两个多糖分级组分PSPⅠ和PSPⅡ,回收率分别为74.06%,23.26%。PSPⅠ中多糖含量为95.39%,PSPⅡ中多糖含量为92.69%。