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目的 根据胰岛素受体介导的信号转导通路,构建STAT5b应答元件靶控报告基因的细胞模型,通过检测报告基因表达水平间接监测胰岛素受体（IR）激酶活性,从而为高通量地筛选出以IR激酶为靶标的药物提供新的细胞模型。 方法 （1）转染方案的选择:通过对pEGFP-3与脂质体不同的转染比例,转染HepG2细胞表达GFP效率比较,确定最佳的转染方案。（2）转染细胞模型的建立和验证:STAT5b靶控报告基因（联合或不联合IR基因及联合或不联合STAT5b基因）对HepG2细胞或CHO细胞的转染,检测胰岛素对转染细胞STAT5b靶控报告基因表达的影响,并比较分析联合或不联合IR基因及联合或不联合STAT5b基因对细胞模型灵敏性的影响,选择最佳的细胞转染模型。（3）考察胰岛素对细胞模型的量效和时效的关系。（4）通过IR激酶抑制剂考察细胞模型的特异性。（5）通过Z′因子考察细胞模型的稳定性。（6）利用MTT法考察胰岛素对细胞增殖功能的影响。 结果 （1）用pEGFP-C3转染HepG2细胞来确定质粒DNA与lipofectamineTM2000最佳转染方案为质粒DNA（μg）:lipofectamineTM2000（μ1）=1:2。（2）HepG2细胞株与质粒组合的考察,结果表明转染外源性的人胰岛素受体pRC/CMV·hIR质粒可以显著提高细胞模型的灵敏度。（3）CHO细胞株与质粒组合的考察,结果表明STAT5b蛋白在诱导Luc表达中发挥着重要作用的,本实验通过共转染pBS-SK-STAT5b质粒可以达到此目的。分析比较两种细胞株的实验结果,本实验选用pSTAT5b3-TK-LUC、pSV-μ-Gal、DRC/CMV·hIR与pBS-SK-STAT5b四种质粒共转染CHO细胞建立细胞模型。在10-7mol/L胰岛