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目的探究负载富血小板纤维蛋白(Platelet-Rich Fibrin,PRF)的新型水凝胶的制备方法及相关性质,并观察该水凝胶对兔骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal StemCells,BMSCs)体外成软骨分化的影响,为临床进行软骨缺损的修复提供一种新的水凝胶支架。方法首先制备结合京尼平的壳聚糖温敏水凝胶。将2%(w/v)壳聚糖(Chitosan,CS)溶液、56%(w/v)β-甘油磷酸钠(β-glycerophosphate,β-GP)溶液以及 0.1%(w/v)或0.05%(w/v)京尼平溶液按不同体积比混合得到CS/GP、CS/GP/京尼平混合溶液,分别检测它们在37℃时的成胶时间,观察大体强度以及体外降解情况;将水凝胶制备成冻干支架后进行扫描电镜观察(Scanning Electron Microscope,SEM)、傅里叶红外光谱分析(Fourier Transform Infrared Spectrometer,FTIR)、溶胀度检测。再通过一次离心法制备PRF,将PRF冻干后研磨成粉加入上述水凝胶的混合液中,观察该负载PRF的新型水凝胶体外TGF-βl、IGF-l的缓释情况,并通过CCK-8(CellCounting Kit-8)法检测负载PRF的水凝胶冻干支架浸提液的细胞毒性。最后,将BMSCs接种于含有水凝胶的12孔板中,通过二乙酸荧光素(Fluoresceindiacetate,FDA)荧光染色观察细胞生长情况;再接种BMSCs于24孔板中,进行成软骨诱导的同时加入负载PRF的新型水凝胶、壳聚糖温敏水凝胶以及空白对照,培养2周后通过HE染色、番红O-固绿染色、阿利新蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色以及采用阿利新蓝比色法定量检测上清液糖胺聚糖(Glycosaminoglycans,GAGs)含量、ELISA竞争法定量检测上清液Ⅱ型胶原含量,观察负载PRF的新型水凝胶对BMSCs成软骨分化的影响情况。结果体积比为6:1:1的CS/GP/0.1%京尼平混合液能够在37℃下8分钟左右形成大体强度为5级的水凝胶;该水凝胶在37℃体外环境下,第7周左右可达到完全降解;SEM结果显示冻干支架内部呈海绵状多孔结构;傅里叶红外光谱分析显示京尼平与CS发生了交联作用;溶胀度为(404.62±105.39)%,提示吸水性良好。TGF-β1、IGF-1等生长因子缓释检测结果显示,负载PRF的新型水凝胶与PRF缓释生长因子的能力大致相当,差异无明显统计学意义(P>0.05);细胞相容性检测结果显示负载PRF的新型水凝胶具有良好的细胞相容性。FDA荧光染色显示BMSCs在水凝胶表面增殖良好;软骨相关染色结果显示负载PRF的新型水凝胶组染色结果均呈阳性,而壳聚糖温敏水凝胶组和空白对照组呈弱阳性;三组上清液均含有GAGs和Ⅱ型胶原,负载PRF的新型水凝胶分泌量在四周内均高于其他两组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论采用体积比为6:1:1的CS/GP/0.1%京尼平的混合溶液能够形成理化性质较好的壳聚糖温敏水凝胶;负载PRF的新型水凝胶能够以一定速率缓释生长因子,该水凝胶具有良好的细胞相容性,并能在一定程度上促进BMSCs成软骨分化,具有在软骨组织工程领域的应用前景。