抗生素是一种对细菌生长具有抑制作用或能够杀死细菌的药物,广泛应用于临床、农业、养殖等方面。大量的抗生素进入环境后严重危害生物、人体健康及导致耐药细菌的产生。目前对于水中抗生素的检测通常采用液相色谱-质谱等理化检测方法,虽然该类方法检测灵敏度高、准确性好,但存在检测的前处理复杂、检测通量小、检测费用高的限制,无法对水中抗生素进行高通量的快速筛查。针对水中抗生素的快速高通量筛查需求,本论文针对水中磺胺类抗生素污染物,基于抗原抗体特异性免疫反应原理,设计相关实验优化反应条件,初步建立磺胺类抗生素间接竞争ELISA免疫检测方法;进一步分析解决该方法实际检测中环境基质干扰问题,研究建立抗体缓冲体系减弱或消除水体基质干扰;开展实际水样加标检测研究,并对其性能指标(检出限、精密度、准确度)进行系统评估,提出所建立的抗生素间接竞争ELISA免疫检测方法的标准化适用性方案,为抗生素污染的实际检测提供有效技术支撑。本文取得的主要结论如下:(1)初步建立了磺胺类抗生素间接竞争ELISA检测方法。通过对包被抗原、一抗及二抗浓度、封闭时间和反应时间等条件的优化,确定磺胺类包被抗原的浓度为5μg/mL,一抗的稀释倍数为1:2000;磺胺二甲基嘧啶包被抗原的浓度为3μg/mL,一抗的稀释倍数为1:4000;二抗的稀释倍数为1:700;封闭时间至少保证80min,反应时间为60min以上。建立了磺胺类间接竞争ELISA检测的标准曲线,通过Logistic方程拟合分析得知,磺胺类的检出限为2.64μg/L,定量检测区间为7.07～244.86μg/L;磺胺二甲基嘧啶的检出限为7.03μg/L,定量检测区间为23.26～367.07μg/L。进行了磺胺类与其他大类抗生素以及磺胺二甲基嘧啶与几种常见的磺胺类结构类似的抗生素的交叉反应,可知磺胺类抗生素抗体与四环素类、喹诺酮类、林可类抗原基本无交叉反应,磺胺二甲基嘧啶抗体与磺胺对甲氧嘧啶、磺胺喹嗯啉等结构类似物的抗原交叉反应率很低;(2)进行水中常见基质对于间接竞争ELISA检测的影响及消除研究。表明当pH为6.0～8.0、重金属的质量浓度小于0.32mg/L、钙镁离子的浓度小于400mg/L及甲醇百分比小于20%时对标线的影响较小;当采用含质量浓度为6mg/mL EDTA和质量浓度为8mg/mLBSA的6xPBS作为抗体稀释液时,可以对pH(5～9)、重金属(27种重金属混标浓度≤1.25mg/L)、硬度(钙镁离子浓度≤800mg/mL)和甲醇(体积比≤40%)等基质的缓冲效果较好;并用该缓冲体系进行基质影响较大的间接竞争ELISA检测,缓冲效果较好;(3)提出了磺胺类间接竞争ELISA检测标准化方案,包括水样的采集、运输和保存、主要检测所需的试剂及仪器、实验操作的规范化、数据处理及表示和筛查布板方案。通过对低中高三个不同浓度的磺胺类和磺胺二甲基嘧啶进行7次平行加标检测,得到磺胺类间接竞争ELISA的检出限为2.34μg/L,磺胺二甲基啼啶间接竞争ELISA的检出限为6.82μg/L;磺胺类和磺胺二甲基嘧啶的相对标准偏差均小于20%,说明间接竞争ELISA精密度良好;计算得到的磺胺类和磺胺二甲基嘧啶的平均回收率均在100±20%以内,间接竞争ELISA的检测准确度良好。