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目的：制备高特异性、高亲和力的抗人心肌肌钙蛋白I（cTnI）单克隆抗体，并筛选出最佳配对抗体，建立双抗体夹心ELISA检测方法。 方法：用Discovery Studio4.0软件预测cTnI-T-C复合物的cTnI亚基上的抗原表位，选择cTnI上的13-24，78-90的氨基酸序列分别偶联载体蛋白BSA和KLH形成抗原肽BSA-1，KLH-2。用两种抗原肽和人源的cTnI-T-C复合物作为免疫原免疫BaLb/c小鼠，通过杂交瘤技术、有限稀释的克隆技术获得能够稳定分泌抗体的单克隆细胞株，鉴定抗体的亚型，并制备腹水型单抗、纯化抗体并对抗体特异性进行鉴定；通过Discover Studio4.0软件进行模拟抗原抗体分子对接和相互作用进行配对预测。通过双抗体夹心ELISA法，对三株抗体进行配对，筛选出最佳配对的抗体，并优化反应条件，建立双抗体夹心ELISA方法，并对30份临床血清样本进行检测。 结果：1、获得三株分别针对BSA-1、KLH-2、cTnI-T-C复合物的抗体Ab1，Ab2，Ab3；抗体亚类分别为IgG1,IgM,IgG1，Ab3识别的是cTnI亚基上的抗原表位，三株抗体均能够识别不同形式cTnI。 2、Discovery Studio成功模拟出三株抗体的结构，抗体成功与抗原进行对接。并且可以相互进行配对。双抗体夹心ELISA法筛选出2对能够配对的抗体，其中Ab1/HRP-Ab3为最佳配对抗体，建立起的双抗体夹心ELISA法标准曲线的检测范围是30ng/ml～500ng/ml。Ab1和Ab3亲和力常数分别为1.62×109L/mol，2.60×108L/mol，该方法能够检测不同存在形式的cTnI。用自制的双抗夹心ELISA方法对30份临床样本进行检测，阳性检出率为77.3%，阴性检出率为100%。 结论：筛选出一对能够配对的高特异性的抗体，建立起cTnI双抗体夹心ELISA的检测方法，为建立快速简便检测cTnI试剂盒奠定基础。