中国卤虫（Artemia sinica）处于恶劣环境时能够产生滞育卵,滞育卵具有极强的抗逆性,能够在干燥环境下保存数年。当外界环境变好的时候,滞育卵能够打破滞育重新启动胚胎发育。有关中国卤虫滞育及滞育解除相关分子机制和调控网络的研究成为了中国卤虫研究的热点。NEDD4是HECT家族的E3泛素蛋白连接酶,能够通过K63和K48连接的多泛素化参与多种细胞生命活动的调节机制,如DNA修复、蛋白质运输、自噬、免疫和炎症等过程。此外,NEDD4还可以单泛素化其底物,并催化鲜为人知的K6和K27连接的多泛素化,表明NEDD4通过单/多泛素化和多种连接泛素化发挥着多种调控作用。因此,本研究对As-NEDD4在卤虫滞育胚胎重启动以及胚胎的早期发育中的作用进行一系列的研究。本研究中,首次利用同源克隆和RACE技术得到了nedd4基因的EST和5’UTR共2453bp,其中包含完整结构域序列,最大开放阅读框为2361bp,编码了786个氨基酸,蛋白分子量为90KD。生物信息学分析结果表明As-NEDD4是不含有信号肽以及跨膜结构的亲水性非分泌蛋白。通过RT-QPCR和Western Blot实验,表明在中国卤虫滞育解除及早期胚胎发育过程中,NEDD4的转录水平和翻译水平表达模式相似,都呈现段落式的表达特点,这样的表达模式同中国卤虫滞育解除后培育0-5h、15-20h和40-72h这几个关键时期的胚胎发育十分契合。此外,我们还检测了作为As-NEDD4调控的重要自噬标记物As-MAP1LC3的表达,其中与As-NEDD4表现了相同的表达模式,二者相互作用参与早期胚胎发育自噬体的生物发生。然而作为NEDD4重要底物的Akt的表达模式几乎并未和As-NEDD4的表达呈现较高的相关性,这可能是由于As-NEDD4介导的泛素化调节As-Akt磷酸化水平,但不调节As-Akt总量,所以并未表现出总量上的明显相关性。在低温胁迫下的WB实验中三种蛋白均随着温度降低呈现先降低再升高而后再降低的趋势,可能表明这三种重要的细胞蛋白均参与了低温胁迫反应过程。根据免疫荧光技术对As-NEDD4进行了亚细胞定位,结果表明As-NEDD4的表达在虫体的各部位均有表达,并且与细胞核呈现很大程度的共定位。结合相关文献和我们的实验结果,我们有理由推测在滞育卵中降至极低水平的自噬过程,在滞育解除后可能被As-NEDD4调节激活参与滞育解除和早期胚胎发育,但其具体的调控机制还有待于进一步研究。