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目的:采用两种改良方法体外分离培养人脐带血间充质干细胞(hUCB-MSCs),对其进行生物学鉴定,观察其与支架材料β-磷酸三钙(β-TCP)的生物相容性,并探讨人脐带血血清(hCS)对其体外培养扩增的支持作用。方法:取28份足月产新生儿脐带血,以密度梯度离心法分离单个核细胞,接种于含体积分数0.1胎牛血清的α-MEM培养基中,待细胞贴壁之后按两种改良方法进行培养。显微镜下观察hUCB-MSCs的形态;流式细胞仪测定细胞免疫表型;进行成骨、成脂及成软骨诱导并染色;将hUCB-MSCs与β-TCP复合,扫描电镜下观察其在材料表面及内部的生长情况;将hUCB-MSCs置入含体积分数0.1 hCS的α-MEM培养体系中,观察其生长增殖情况及分化能力。结果:28份脐带血中13份获得可稳定传代的成纤维样细胞(I组,4/10;II组,9/18);该细胞可表达间充质干细胞表面抗原CD105、CD29,在特定条件下可向成骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞转化;该细胞与β-TCP复合后在其表面及内部生长、增殖良好;hUCB-MSCs可在含hCS的培养液内正常生长,传代5代无明显形态改变并在含特定诱导剂的培养基中可向成骨细胞、脂肪细胞分化。结论:脐带血中存在MSCs,培养方法经改良后可提高hUCB-MSCs的培养成功率。hUCB-MSCs具有多向分化潜能,在特定诱导剂诱导下,可分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞。hUCB-MSCs和β-TCP生物相容性良好。初步研究发现人脐带血血清对hUCB-MSCs体外培养扩增具有支持作用。hUCB-MSCs可作为一种新的种子细胞用于骨组织工程学研究。