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大肠埃希菌为革兰氏阴性菌,广泛存在于自然界中,可引起人和动物感染,是一种重要的人畜共患病源菌。OmpC蛋白是大肠埃希菌主要的外膜蛋白,实验发现OmpC蛋白具有很好的免疫原性,能有效抵抗大肠埃希菌类疾病的感染,在疫苗上有很好的应用前景。本试验利用分子生物学方法构建了大肠埃希菌外膜蛋白OmpC的原核表达菌株;采用正交试验设计优化OmpC重组菌株最佳培养条件及最佳蛋白诱导表达条件;包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶方法获得高纯度的OmpC蛋白;通过免疫小鼠获得多克隆抗体,并进行小鼠攻毒大肠埃希菌肠道致病菌的免疫保护作用研究;同时,对OmpC蛋白进行生物信息学分析与重组表位的设计。主要研究结果如下:(1)原核表达菌株的构建:利用分子克隆方法构建OmpC重组质粒,通过SDSPAGE蛋白电泳证实OmpC蛋白成功表达。(2)OmpC蛋白诱导表达条件优化:正交试验确定表达菌最佳培养条件为:葡萄糖浓度0,转速230r/min,装液量50mL;最佳的蛋白诱导条件为:加IPTG时菌液OD600值0.8,加IPTG终浓度0.3mmol/L,诱导时间8h,诱导温度32℃。(3)OmpC蛋白多克隆抗体制备:Westernblotting检测OmpC抗血清具有很好的特异性,ELISA法证实OmpC抗血清效价达到1:6400倍。(4)OmpC蛋白免疫原性分析:通过免疫小鼠OmpC蛋白,攻毒大肠埃希菌肠道致病菌,结果显示其免疫保护率达到63.64%。(5)OmpC蛋白生物信息学分析与表位疫苗设计:研究发现OmpC蛋白在不同种细菌间存在较高的同源性,可能具有交叉免疫保护作用;1-21位氨基酸可能为信号肽位置,无跨膜结构并定位于细胞膜外;存在5个优势B细胞表位,1个CTL表位,1个Th细胞表位;并重组拼接设计获得OmpC蛋白表位疫苗。