骨肉瘤(Osteosarcoma)是好发于青少年的一种恶性肿瘤，该瘤恶性程度甚高，预后极差，可于短期内转移。与其他肿瘤一样，骨肉瘤发生发展是一个多基因多阶段过程，寻找其发生发展中的关键基因并进行阻断和干预是目前的研究重点。Rab25定位于染色体1q22，是近年来发现的Ras癌基因家族的亚家族Rab中的一员，与Rab11具有同源性,参与细胞的动力过程。既往研究发现Rab25在卵巢癌、乳腺癌组织中表达高于其他组织，认为Rab25有可能成为卵巢癌治疗的又一新途径，已有研究显示Rab25与肿瘤的发生和预后密切相关。ERK是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)信号转导途径中的一个重要成员，参与细胞的生长、分化、转移全过程，在多种肿瘤组织中高表达。目的检测骨肉瘤及其癌旁组织中Rab25和ERK mRNA及蛋白的表达水平差异，分析两者之间关系及其对骨肉瘤发生发展的影响，为寻找骨肉瘤早期诊断和治疗的特异性靶点提供实验依据。方法1．标本收集：骨肉瘤及其瘤旁组织均取自郑州大学第一附属医院、河南大学第一附属医院和河南大学淮河医院，所有患者均签订知情同意书。患者年龄13－26岁，其中普通型骨肉瘤18例、毛细血管扩张型骨肉瘤9例、小细胞骨肉瘤3例。癌及癌旁正常组织均经病理学诊断。2．RT-PCR(反转录聚合酶链反应)：参照《分子克隆实验指南》方法提取组织RNA，取同等量RNA依照逆转录试剂盒说明进行逆转录并扩增。3．Western blot：参照《分子克隆实验指南》方法提取组织蛋白，并进行抗体印迹实验，用DAB显色、用ECL(化学发光法)法曝光显色。4．半定量分析：蛋白和mRNA均以β-actin为内参，应用Bioimaging System成像分析系统扫描目的条带的灰度，检测骨肉瘤及其癌旁组织的Rab25和ERKmRNA和蛋白的表达水平。5．统计学处理：所获资料采用统计软件SPSS13.0软件处理，两组间的均数比较采用t检验，率的比较采用卡方检验，显著性水准取P＜0.05。结果1．Rab25mRNA在骨肉瘤组织的相对表达量为0.5231±0.1331，癌旁组织的相对表达量为0.1226±0.0115，差异有统计学意义（P＜0.05），ERK mRNA在骨肉瘤组织的相对表达量为0.4632±0.1237，在癌旁组织中的相对表达量为0.1134±0.0193，差异有统计学意义（P＜0.05）。2．Rab25蛋白骨肉瘤组织的相对表达量为0.4326±0.1058，癌旁组织的相对表达量为0.1024±0.0145，差异有统计学意义（P＜0.05），ERK蛋白骨肉瘤组织的相对表达量为0.5466±0.1895，在癌旁组织中的相对表达量为0.1256±0.0111，差异有统计学意义（P＜0.05）。3．不同病理类型的骨肉瘤组织Rab25和ERK mRNA和蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）结论1．Rab25和ERK mRNA在骨肉瘤组织中的表达高于癌旁组织。2．Rab25和ERK蛋白在骨肉瘤组织中的表达高于癌旁组织。3．Rab25和ERK mRNA和蛋白在不同病理类型骨肉瘤组织中的表达水平差异无统计学意义。