【摘 要】
：
棉花作为世界上重要的经济作物,在国民经济中具有重要的地位,但其功能基因组的研究却相对落后。为了配合植物功能基因组高通量研究的发展方向,构建棉花的突变体库已成为必然,借助于理论上可以获得基因组中任一基因的突变体,最终实现阐释基因功能的目的。目前,研究基因的功能主要是创造基因的突变体,寻找基因的突变表型来阐释基因的功能。Enhancer trap技术作为功能基因组研究的有力工具,它往往以T-DNA为载
论文部分内容阅读
棉花作为世界上重要的经济作物,在国民经济中具有重要的地位,但其功能基因组的研究却相对落后。为了配合植物功能基因组高通量研究的发展方向,构建棉花的突变体库已成为必然,借助于理论上可以获得基因组中任一基因的突变体,最终实现阐释基因功能的目的。目前,研究基因的功能主要是创造基因的突变体,寻找基因的突变表型来阐释基因的功能。Enhancer trap技术作为功能基因组研究的有力工具,它往往以T-DNA为载体将Enhancer trap元件随机插入到植物基因组中创建植物Enhancertrap系,通过检测不同Enhancer trap系中报告基因的表达模式来发掘新基因及其调节序列。
本研究采用农杆菌介导的转基因方法,旨在构建棉花T-DNA插入的Enhancer trap突变体库。在这两年的研究中,取得了以下几个方面的进展:
1.建立了农杆菌介导的棉花品种‘YZ1’高效遗传转化体系,抗性愈伤率为70％-80％,60％的抗性愈伤再生成植株。高效的遗传转化体系为大规模创造棉花T-DNA插入突变体库奠定了基础。
2.总共获得了84个独立转化子,82％的转化植株PCR检测为阳性。
3.本研究发现不同细胞系的再生植株的GUS报告基因的表达模式相差很大,这种现象支持T-DNA插入是随机事件的假说。GUS基因在PCR检测呈阳性的植株中,有很多是特异性表达的,其中在愈伤组织中的表达频率最高达到63.1％,在胚状体中的表达频率为47.6％,在花中的表达频率为28.6％,根部的表达频率为31％。
4.采用TAIL-PCR、PCR-Walking的方法扩增棉花T-DNA侧翼序列,其结果如下:运用TAIL-PCR方法只是前两轮得到smear;运用PCR-Walking方法扩增得到600 bp和800 bp的片段。
其他文献
玉米胚乳中起主要作用的是淀粉合成酶是zSSI,其编码基因是zsS1,该基因是玉米淀粉合成过程中的关键酶基因之一。本研究通过对本课题小组克隆的zsS1启动子(1637 bp)进行5′缺失,用来代替植物表达载体pCAMBIA1301上的CaMV35S组成型启动子,以gus为报告基因,构建了5个新的植物表达载体。经基因枪轰击后,在授粉后15天的玉米自交系18-599胚乳上进行瞬时表达。然后,用荧光定量检
促分裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径在植物生长发育和生物与非生物胁迫响应方面起到了重要的作用。在水稻中,促分裂原活化蛋白激酶激酶基因(MAPKKs)的抗逆功能依然不清楚。本研究通过表达序列标签(EST)和cDNA的数据比对的方法搜寻水稻数据库,得到了9个水稻促分裂原活化蛋白激酶激酶基因(OsMKKs)。本研究的主要内容如下: 1、
我国主要是以稻谷的形式储备粮食,然而因陈化变质、仓储害虫及霉变等引起的损失每年约达百亿斤。虽然化学药剂熏蒸和常规技术如低温、气调等可以解决一些问题,然而其受到熏蒸剂污染环境、虫害的抗性以及能源和材料等限制。如何解决稻谷储藏中品质劣变及防虫防霉等问题,目前迫切需要一种高效、安全、环保的方法。微波是一种有效的防虫防霉方法,然而目前缺乏在防虫防霉的微波条件下微波处理对稻谷品质的研究。本课题以稻谷为研究对
油菜是食用植物油和植物蛋白的最主要来源,也是潜在的仅次于豆粕的大宗饲用蛋白源,而且在现代工业上的用途也日益广泛。随着人们生活水平的不断提高,对油菜产量和品质的要求也相应提高,因此,开展油菜杂种优势利用研究,把品质育种与杂种优势利用结合起来,选育高产优质油菜品种已成为目前油菜育种的主攻方向。油菜雄性不育无疑是利用油菜杂种优势的一个有效途径,并且已经广泛地应用于生产实践。关于甘蓝型油菜的不育机制,一直
棉花是世界重要的经济作物,也是最大的天然纤维作物。随着纺织工业的发展和人民生活水平的不断提高,对棉花的纤维品质提出了更高的要求。本研究以16个亲本构建的综合群体为材料,借助SSR分子标记技术,利用分子标记和纤维品质数据(2006年的单株数据和2007年的株行数据)通过方差分析和回归分析两种方法进行关联分析,旨在找到与品质性状有关联的标记,从而实现对品质性状的初步定位。 取得的实验结果如下:1.纤
棉花是世界上重要经济作物,棉纤维是纺织工业中天然纤维的主要来源。除了具有重要的经济价值,棉纤维还是研究植物细胞伸长和细胞壁建成以及纤维素生物合成的优良模型。棉纤维由棉花胚珠外珠被表皮层的单细胞发育而成,属于种子表皮毛,其分化和发育过程由四个相互重叠的时期组成。在棉纤维发育过程中,有大量基因活跃表达。克隆这些与棉纤维发育有关的基因,并精确阐释其功能,不仅可以深入认识棉纤维伸长和纤维素生物合成的分子机
本研究以搭载太空遨游1天的“神舟五号”和5天的“神舟六号”的早稻品种沪旱3号和沪旱7号种子为材料,研究空间诱变的分子多态性以及生物学效应。种子返回后在上海和海南连续进行繁种至SP4代,获得稳定的株系,株系间存在明显的变异。本研究立足于探索这些变异的分子基础,主要结果如下:1.搭载种子经过空间诱变,产生丰富的突变类型,包括株高的变化、生育期推迟与提前、芒的变化、粒型的变化以及叶片白化和黄化等具有明显
棉花是世界上重要的经济作物,棉纤维是纺织工业中天然纤维的主要来源。除了具有重要的经济价值,棉花纤维还是研究细胞分化、纤维素合成、细胞伸长、次生壁加厚等生命过程的理想材料。 克隆这些与棉纤维发育相关的基因并阐释其功能,不仅可以深入认识棉纤维伸长和纤维素生物合成的分子机理,还可以为改良棉纤维品质的遗传工程奠定基础。我们研究了两个棉纤维特异表达基因GhAGP3(阿拉伯半乳糖蛋白基因)以及GhFLA1(
湿害和干旱是作物主要的逆境胁迫之一,也是我国油菜产区影响最终产量和品质的主要逆境因子之一。本研究利用具耐湿性和抗旱性差异的两份材料为双亲构建了一个由F1小孢子培养得到的150个DH系,通过两个环境下的田间试验,考察株高等5个性状,结合分子标记分析,对性状及耐湿系数和抗旱系数进行QTL定位,分析甘蓝型油菜苗期的耐湿性和抗旱性。 主要结果如下:1、两亲本比较发现,母本(No2127-17×275B
杂草是棉花生育早期的主要危害,而草甘膦是一种广泛应用的高效低毒芽后灭生性除草剂,筛选抗草甘膦突变体及选育抗草甘膦品系具有重要的意义。本试验通过体细胞无性系筛选的方法进行棉花抗草甘膦突变体的筛选工作。在体细胞筛选中,首先通过下胚轴诱导产生愈伤组织,然后把经过扩繁的愈伤组织放入含有草甘膦的继代培养基中继代培养三次,筛选出抗性愈伤组织后再转入不含草甘膦的培养基中恢复培养三次,而后抗性愈伤组织分化成苗。