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目的本研究旨在检测MYCN在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达情况,分析其表达水平与临床病理参数之间的相关性。探讨MYCN对NSCLC细胞株增殖的影响并进一步研究及调节机制,最终明确MYCN对NSCLC的增殖的影响。方法1.组织水平:(1)选取8对新鲜的NSCLC组织及其癌旁组织,采用免疫印迹技术检测MYCN和PCNA的表达;(2)采用免疫组化技术检测140例NSCLC组织标本中MYCN、SOX2和Ki-67的表达;(3)根据临床病理资料分析MYCN的表达和NSCLC患者的临床病理参数、SOX2和Ki-67之间的相关性。2.细胞水平:(1)采用WB检测NSCLC各细胞株中MYCN的表达;(2)利用流式细胞仪分析检测MYCN对癌细胞周期的影响;(3)干扰MYCN表达后,WB检测Cyclin D1和PCNA表达水平,CCK-8和细胞流式检测MYCN对癌细胞增殖的影响;(4)干扰和过表达SOX2表达后通过WB检测下游MYCN和Cyclin D1、PCNA的表达水平来探索SOX2-MYCN轴的影响机制。结果1.组织水平:(1)WB结果显示MYCN蛋白和PCNA在NSCLC组织中的表达明显高于对应的癌旁组织;(2)IHC结果显示MYCN、SOX2、Ki-67的蛋白在NSCLC组织中的表达明显高于对应的癌旁组织,且临床统计分析结果表明MYCN和NSCLC患者的吸烟状况(p=0.012)、肿瘤大小(p=0.008)、分化程度(p=0.005)、分级(p=0.001)、肿瘤复发(p=0.032)、Ki-67(p<0.001)以及SOX2(p<0.001)显著相关;(3)相关性分析结果显示MYCN的表达与SOX2(p<0.001)、Ki-67(p<0.001)的表达呈正相关;(4)Cox回归模型单因素及多因素分析结果显示MYCN(p=0.035)和分化程度(p<0.001)可作为NSCLC预后的独立指标;(5)生存分析结果表明MYCN的表达和NSCLC病人的预后呈负相关(p<0.001)。2.细胞水平:(1)WB结果显示MYCN在A549细胞株中表达最高,而SOX2在A549细胞株中表达最高,在Spca-1细胞株中表达最低,因此选取这两株细胞株作为实验细胞株;(2)血清饥饿释放实验结果显示MYCN随着细胞周期的进展,其表达增多,表明MYCN参与NSCLC细胞周期的进程;细胞流式实验结果显示MYCN可影响A549细胞株的增殖;(3)CCK-8和细胞流式实验结果显示干扰MYCN的表达可抑制A549细胞的增殖;(4)WB结果显示上调/下调SOX2的表达可分别增强/抑制MYCN和Cyclin D1的表达。结论1.组织水平:(1)MYCN是原癌基因,其在NSCLC组织中高表达;(2)MYCN与NSCLC患者的预后呈负相关;2.细胞水平:(1)MYCN可能是通过调节细胞周期来促进细胞增殖;(2)干扰MYCN可抑制NSCLC细胞的增殖,因此MYCN可能是治疗NSCLC的潜在靶点;(3)SOX2,作为一个热门的癌转录因子,参与调节MYCN的表达,是MYCN的上游;(4)SOX2有可能是通过调节MYCN的表达来促进细胞的增殖,引起NSCLC的进展。