【摘 要】
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DNA甲基化,作为新型的生物检测标志物,在人类疾病检测和预后方面展示出巨大的应用潜能。现已研发了传统检测和生物传感器等方法实现了对DNA甲基化水平的检测,但是上述检测技术由于设备昂贵或操作过程繁琐等缺陷,限制了它们在临床诊断上的应用。石墨烯,因其优良的导电性,已广泛应用于传感领域,尤其是以单层石墨烯为通道的场效应制备的晶体管(GFET),因检测灵敏度高,己实现了对多
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DNA甲基化,作为新型的生物检测标志物,在人类疾病检测和预后方面展示出巨大的应用潜能。现已研发了传统检测和生物传感器等方法实现了对DNA甲基化水平的检测,但是上述检测技术由于设备昂贵或操作过程繁琐等缺陷,限制了它们在临床诊断上的应用。石墨烯,因其优良的导电性,已广泛应用于传感领域,尤其是以单层石墨烯为通道的场效应制备的晶体管(GFET),因检测灵敏度高,己实现了对多种生物分子的检测。到目前为止,仍缺少关于利用GFET对DNA甲基化水平检测的研究。因此,在本研究中,我们主要是开发一种基于GFET无标的检测方法实现对DNA甲基化的检测。本研究中,我们选取谷胱甘肽巯基转移酶(GSTP1)启动子区域中中的一段序列,将该序列中的胞嘧啶进行不同数目和不同位点的甲基化修饰后,作为本实验的目的序列。首先,为了了解不同甲基化水平修饰的目的序列与DNA探针反应的动力学,我们利用实时荧光定量PCR技术,对不同甲基化修饰水平的目的序列与DNA探针的杂交过程进行系统的分析:同时利用荧光淬灭原理,观测不同甲基化修饰水平的序列对DNA探针链置换反应速率的影响。结果表明:无论足与DNA探针的杂交还是链置换反应,目的序列中的甲基化修饰数目和修饰位点均对上述反应产生影响。其次,利川GFET表面修饰的DNA探针不同甲基化水平修饰的目的序列进行链置换反应,由于GFET休系内电荷变化引起的GFET电流曲线偏移和电阻变化趋势的差异,实现了对不同甲基化水平修饰的目的序列的检测与区分,且检测灵敏度为10pM。该实验的结果为DNA甲基化检测提供了一种新型、无标、便捷的检测方法。同时,我们也首次利用GFET实现了对不同甲基化修饰水平的检测。
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