排汗是皮肤的重要功能之一，皮肤通过排汗来维持基础代谢体温。汗腺是皮肤的一个附属机构，是排汗的承担者，没有汗腺的皮肤如疤痕等不能排汗。随着医疗卫生改革和居民生活水平的提高，大面积深度烧伤病人存活率越来越高。大面积深度烧伤病人的烧伤面积可达98%，病人伤愈后，在创面形成疤痕组织，而疤痕组织不含有汗腺，不能排汗，大大影响了病人的生活质量。如何再生足够量的汗腺，使病人皮肤排汗功能修复，是临床上亟待解决的问题。　　由于大面积深度烧伤病人的烧伤面积很大，不可能从病人身上取得大量的汗腺细胞，所以汗腺细胞的来源很少，并且汗腺细胞是体细胞，在体外难以实施扩增培养。所以本论文旨在通过体外分离获得人汗腺细胞，继而构建人汗腺细胞来源的iPS，为获得大量的修复汗腺的种子细胞奠定基础。　　第一部分人汗腺细胞的分离、体外培养及鉴定　　目的：从外科手术废弃的幼儿六指皮肤中分离获得汗腺细胞，建立体外培养传代方法，并对其生物学特性进行鉴定。　　方法：将幼儿六指皮肤除去脂肪和结缔组织，剪成1mm2大小，用IV型胶原酶于37℃消化4h，在倒置显微镜下提取出汗腺。将汗腺干贴于6cm细胞培养皿中，加入汗腺细胞培养基于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。2-3d后，细胞从汗腺中长出。RT-PCR和免疫荧光染色技术检测汗腺细胞的标志基因和蛋白质CEA、CK14和CK18的表达。　　结果：人汗腺细胞呈典型的上皮细胞样生长，排列紧密，类似铺石路状，细胞边界明显，核清晰；RT-PCR和免疫荧光染色技术结果显示，分离培养的细胞表达汗腺细胞的标志基因和蛋白CEA、CK14和CK18。　　结论：成功建立人汗腺细胞的分离和体外培养体系，并对其生物学特性进行初步鉴定，为进一步研究汗腺细胞奠定了物质基础。　　第二部分人汗腺细胞来源的iPS制备及生物学特性鉴定　　目的：重编程人汗腺细胞为诱导多能性干细胞，并对其生物学特性进行初步分析。　　方法：取体外培养10d后的汗腺细胞，以1×105的密度接种于6cm细胞培养皿中。第二天，加入含有4种胚胎干细胞的转录因子基因Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc的慢病毒的无血清培养基。2-3d后，消化接种到铺有滋养层细胞的6cm细胞培养皿中，培养约10d后，挑选克隆和细胞形态与hESC相同的克隆，接种于铺有滋养层细胞的24孔板中。培养约10d后，再次挑选克隆和细胞形态与hESC相同的克隆，接种于铺有滋养层细胞的6孔板中。RT-PCR检测诱导后的细胞Oct4、Sox2、KLf4、c-Myc和Nanong基因表达，免疫荧光技术分析4因子转染细胞对hESC标志物Oct4、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81的表达。　　结果：（1）人汗腺细胞经慢病毒转染后细胞形态改变，与汗腺细胞差异显著，形成的iPS克隆，形态与hESC形态相似，细胞生长紧密，边界不明显，核质比高，核仁清新，在细胞周围有大量代谢产物；（2）RT-PCR显示汗腺细胞来源的iPS表达基因Oct4、Sox2、KLf4、c-Myc和Nanog；（3）免疫荧光技术显示汗腺细胞来源的iPS的Oct4、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81蛋白质表达呈阳性。　　结论：人汗腺细胞经4因子转染后，成功构建iPS，人汗腺细胞源iPS表达hESC标志基因和相关分子。