传染性支气管炎(Infectious Bronchitis, IB)是由传染性支气管炎病毒引起的一种常见的传染病。该病毒具有囊膜结构,且对温度敏感,该特性为研制传染性支气管活炎疫苗耐热保护剂研究增加了难度。由于温度容易影响该病毒的活性,导致冻干后疫苗产品的病毒效价损失较高,使得传染性支气管炎冻干苗的贮存面临挑战,这也是目前国内生物制品行业的一个普遍性难题。国内常规的冻干苗必须保存在-15℃以下,且保存期偏短,而国外的冻干苗产品在2～8℃可保存两年以上。为降低疫苗效价的损失、提高疫苗质量、延长保存期、解决冷链运输等问题,本文旨在研制鸡传染性支气管炎病毒H120株耐热保护剂。本文的研究内容分为三部分,即耐热保护剂成分的筛选以及冻干曲线参数的调试、耐热保护剂的耐老化实验、耐热保护剂冻干疫苗的实验。在耐热保护剂成分筛选的实验中,共尝试了8组不同的配方,编号从A到H,其中C组又分为C1-C6,D组分为D1、D2。分组冻干后,通过比较产品冻型、溶解度、残留水分含量、效价损失,最终筛选出效果最好的E组作为耐热保护剂,其主要成分为多聚蛋白胨和海藻糖。冻干曲线的调试对冻干疫苗的质量也是至关重要的,必须确保每组耐热保护剂都对应一条合适的冻干曲线。首先对不同的耐热保护剂配制的疫苗进行少量冻干,依据冻干后产品的形态,改变冻干曲线的参数,如预冻的最低温度、升华干燥的温度及真空度等。最终确保当批量疫苗冻干时,产品的形态一致且美观,方可将此次调试的冻干曲线作为标准。调试的冻干曲线(E组)参数如下：预冻的最低温度为-45℃,升华干燥的真空度为0.08mbar,升华温度为-15℃,解析干燥温度为26℃,总冻程约43 h。将E组制成的疫苗分别在37℃、室温(20℃)、2-8℃环境条件下放置10天、2个月、1年,间隔一段时间测定一次EID50,同时设置常规疫苗作为对照组。数据显示,随着时间的推移,疫苗病毒的效价会持续不断降低。耐热保护剂冻干疫苗在37℃条件下放置10d,其效价由10-4.32下降到10-3.38；在室温中放置2个月,效价由10-4.625降到10-3.620,常规疫苗则在1周后就从10-4.75降到10-3.52；耐热保护剂冻干疫苗在2～8℃条件下放置12个月时,效价由10-4.36降到10-3.37,第6个月时检测效价达到10-3.82,而常规疫苗在半年之后效价已经从10-4.45降到10-3.44。将耐热保护剂冻干疫苗用于动物实验,包括安全性检验、免疫效力检验及抗体水平监测。将易感鸡分为A(耐老化前的疫苗)、B(耐老化后的疫苗)、C(PBS对照)三组,每组10只。安全性检验的免疫剂量为10羽份,三组的存活率均达到80%以上。免疫效力检验使用的攻毒株为M41株,攻毒剂量为1羽份,A、B两组的保护率均达到80%以上,对照组只有1只鸡存活。对发病鸡与外表健康鸡进行解剖,作气管的病理切片,电镜下可见发病鸡的气管纤毛脱落,细胞坏死,而外表健康鸡则纤毛完整。抗体水平测试数据表明,A、B两组抗体消长趋势一致,且A组效果较好。两组在21-28 d均达到抗体的最高水平。综上所述,与国内的常规疫苗相比较,本文研制的耐热保护剂对传染性支气管炎冻干苗的保护效果更好。在37℃可保存10 d,在20℃左右的室温中可保存2个月,在2～8℃条件下可保存1年以上,保存期均比常规疫苗长。由此可见该耐热保护剂的研制对提高疫苗质量、解决冷链运输等问题可提供帮助。