黄龙胆根有效成分的提取纯化及抗氧化研究

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本论文以黄龙胆根为研究对象,对其中所含的黄酮类、龙胆苦苷类化合物等进行了提取、纯化工艺研究,对提取物纯化前后龙胆苦苷、黄酮类化合物的含量进行测定,比较了粗产品和纯化品的抗氧化活性,获得的主要结果如下:1、通过单因素和正交实验优化了微波辅助乙醇法提取黄龙胆根黄酮类化合物的提取工艺。结果表明:最佳工艺条件为:微波功率300w,微波时间8mmin,乙醇浓度35%,料液比1:20,提取次数1次。按最佳工艺条件进行提取得率为4.85%。2、利用大孔树脂法对提取所得黄龙胆根黄酮类化合物进行了纯化研究。通过静态吸附与解吸实验确定黄龙胆根黄酮类化合物最佳纯化树脂为AB-8大孔树脂:得出最佳吸附与解析条件:吸附溶液PH=6,最大吸附量为30.13mg/g,吸附时间9h,解吸附乙醇浓度为70%,乙醇体积140mL,解吸附时间30min;通过动态吸附分离黄龙胆根黄酮类化合物参数考察得出:上样液流速为2.00mL/min,洗脱剂流速为2.00mL/min。经纯化后提取物总黄酮类化合物含量由0.020mg/mL提高到0.202mg/mL,较粗品含量提高10.24倍。3、用DPPH法考察了提取物总黄酮清除自由基的能力、FRAP法考察其总抗氧化基能力。结果表明:纯化后的黄龙胆根黄酮其清除DPPH自由基能力、总抗氧化能力都比粗黄酮要好一些;但是清除DPPH自由基能力都不如对照品Vc;而在浓度为0.425mg/mL之后纯化后的黄酮提取物比BHT的总抗氧化能力要强。4、用微波辅助法、超声波辅助法2种方法对龙胆苦苷进行了提取,以提取液的吸光度值为评价指标,通过单因素实验、正交实验对提取工艺进行了优化以获得最佳提取工艺条件。结果表明,超声波辅助法提取的最佳工艺条件为:乙醇浓度70%,料液比1:30,超声时间45 mmin,超声温度35℃。最佳提取条件下提取得率为5.08%。微波辅助法提取的最佳工艺条件为:乙醇浓度70%,微波功率400 W,微波时间9 min,料液比1:30。最佳提取条件下提取得率为5.16%。两种方法比较,微波辅助法优于超声波法。5、利用大孔树脂法对提取所得的龙胆苦苷进行纯化。通过静态吸附与解吸实验选定大孔吸附树脂HPD.100为最佳树脂;静态吸附和解吸实验最佳工艺条件为:吸附时间2.0 h,溶液pH为6,洗脱液为70%的乙醇水溶液,解吸时间4h;动态工艺考察得出的最佳工艺条件为:径高比为1.5:28.3,上样液浓度为1.72mg/mL,上柱水洗体积3 BV,醇洗体积250mL。对最佳纯化工艺的纯化效果进行评价。粗产品中龙胆苦苷含量为0.3659mg/mL,纯化后产品中龙胆苦苷含量为4.7712mg/mL,提高了13.04倍,纯化效果较好。6、用DPPH法考察了龙胆苦苷提取物清除自由基的能力、FRAP法考察其总抗氧化基能力,结果表明:随着提取物溶液中龙胆苦苷浓度的增加,样品清除DPPH自由基的能力、总抗氧化能力随之增强;龙胆苦苷精品的清除DPPH自由基的能力、总抗氧化能力比能力比粗品强;与对照品比较,龙胆苦苷提取物精品、粗品清除DPPH自由基的能力都比BHT强,比Vc弱;而精品总抗氧化能力比BHT强,比Vc弱。
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