胃癌患者血清蛋白谱和手术前后血清蛋白组学变化研究

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背景胃癌是我国最常见的恶性肿瘤,占全部恶性肿瘤发病的17.2%,占我国恶性肿瘤死亡的23.2%,居各种恶性肿瘤发病率首位。每年死于胃癌的人数约有16万,大部分胃癌病人就诊时己属中晚期。当前我国胃癌的早期诊断率仍较低,Ⅰ期诊断在5%左右,而早期胃癌五年生存率可达94%以上,多数患者发现时已是中晚期,5年生存率仅30%左右,因此提高我国胃癌的早期发现及诊断水平,是提高疗效的关键。目前胃癌的早期诊断、术前分期、预后判断、复发或转移的检测均存在着不同的问题,胃癌早期诊断和筛选的方法很多,但存在着特异性与敏感性之间的矛盾。蛋白质组学为肿瘤的早期诊断及分期提供了新的方法。寻找与胃癌相关的肿瘤标志物,探索和建立一种简捷、快速、敏感性高、特异性强的甄别胃癌的关键候选蛋白,并利用这些指标作为指导治疗和判断预后的依据具有重要的临床意义。目的检测胃癌者血清蛋白表达谱、并建立胃癌患者血清蛋白诊断模型;比较了手术前后胃癌者血清蛋白表达谱的变化,对可能的血清标志物进行了筛选,为胃癌的早期血清学诊断提供参考。方法研究对象研究对象来自安阳及其周边地区(n=17),健康对照组(n=21)来自上述地区健康普查胃镜检查正常者。所有研究对象均征得本人同意。液体蛋白芯片系统(ClinProt系统)由功能磁珠、ANCHORCHIP技术、基质辅助辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和ClinProTools生物信息学方法组成。建立胃癌特异蛋白组学诊断模型采用CM10弱阳离子芯片,应用ClinProt系统检测17例首次就诊且病理诊断为胃癌患者和21例健康人血清样本并记录其蛋白质多肽谱指纹,建立胃癌血清蛋白组学诊断模型。筛查胃癌患者术前术后血清蛋白差异收集12例首次就诊且病理诊断为胃癌患者术前和术后1个月血清,经Clinprot磁珠纯化、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MAL DI-TOF-MS)分析建立相应的蛋白质指纹图谱,筛选出差异蛋白。在SWISS-PROT蛋白数据库中检索查询与其相匹配的蛋白质,寻找可能作为胃癌手术治疗后相关的候选蛋白。结果1、胃癌患者血清蛋白组图谱的建立和诊断模型的建立与健康人相比,在胃癌组中,11种蛋白表达上调,质荷比M/Z值分别为:M2822Da、M5341Da、M5910Da M7892Da、M2394Da、M4591Da、M4299Da、M8604Da、M8583Da、M1817Da,M2046Da;5种蛋白表达下调,质荷比M/Z值分别为:M4270Da、M6635Da、M8716Da、M3293Da、 M1450Da,其中M/Z为4299Da和5910Da的两个蛋白质组成的诊断模型能达到鉴别胃癌患者和健康人的最佳诊断效果,在测试模式下,灵敏度和特异度分别为94%和91%。2.胃癌患者术前术后血清差异蛋白平均图谱的建立运用液体蛋白芯片飞行时间质谱系统检测胃癌癌患者术前术后血清蛋白表达谱,共筛选出22种血清差异蛋白,其中有7个差异蛋白峰在术后明显下降,分别为:M5808Da、4963Da、7779Da、3108Da、8604Da、9181Da、5446D。15个蛋白在术后明显升高:4699Da、6015Da、7910Da、7765Da、3934Da、8063Da、1411Da、5032Da、3773Da、6448Da、6610Da、6610D、9408Da、4395Da、3814Da、2820Da。根据差异蛋白的相对分子量(M/Z),按分子量允许误差范围<0.5%,在SWISS-PROT蛋白数据库中检索查询与其相匹配的蛋白质,寻找可能作为胃癌治疗后相关的候选蛋白。结论1. ClinProt系统用于胃癌患者血清蛋白质多肽谱分析具有较好的重复性和精度,可筛选出有意义的差异表达蛋白组多肽谱指纹,可用此方法建立胃癌的辅助诊断模型。2.应用液体蛋白芯片飞行时间质谱系统对胃癌患者术前术后血清的检测,可筛选出有意义的差异表达蛋白组指纹,为胃癌血清标志物的寻找提供参考。
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